ING.BIOQUIMICO EN ALIMENTO

1985-2

REG. 78278854

FACULTAD DE CIENCIAS

IDENTIFICACION DE UN ANTIGENO DE Entamoeba histolytica
QUE PARTICIPA EN LA FAGOCITOSIS

TESIS

PROFESIONAL

QUE

OBTENER

PARA

LICENCIADO

P

R

ARTURO

E

EN

S

E

EL

TITULO

DE

BIOLOGIA

N

CHAVOYA

T

A

PEÑA

GUADALAJARA, JALISCO NOVIEMBRE 1988

---~

-------------~

IDENTIFICACION DEUN ANTIGENO
DE Entamoeba histolytica QUE
PARTICIPA EN LA FAGOCITOSIS

AUTOR: ARTURO CHAVOYA PEÑA

DIRECTOR DE LA TESIS: M. en C. JUAN MORA GALINDO

Esta

tesis

Genética

y

se

realizó

Biología

en

el

Molecular

Departamento

de

del

de

centro

Investigación y de Estudios Avanzados del IPN bajo
la asesoría de la Dra. Esther Orozco Orozco.

I)INTRODUCCION
1.1)
1.2)
1.3)
l . 4)
1.5)
1.6)

Generalidades
Ciclo de vida de Entamoeba histolytica
Trofozoíto
Quiste
Fagocitosis en~ histolytica
Fagocitosis como factor de virulencia de~
histolytica
1.7) Otros factores de virulencia de~ histolytica
1.7.1) Adhesión
1.7.2) Carga eléctrica de superficie
1.7.3) Actividad proteolítica
1.7.4) Actividad formadora de poros membranales·1.7.5) Efecto citopático sobre células en
cultivo
1.8) Mutantes de ~ histolytica
1.9) Anticuerpos monoclonales contra la superficie
de ~ histolytica

1
1
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3
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II) OBJETIVOS

26

III) MATERIALES Y METOOOS

28

3.1) Cultivo de trofozoítos de Entamoeba histolytica
3.2) Cultivo de hibridomas
3.3) Inoculación en ratón de los hibridomascultivados in vitre para la obtención de
líquido ascítico
3.4) Técnica de ELISA
3.5) Inmunofluorescencia indirecta
3.6) Extracción de proteína total de amiba
3.7) Cuantificación de proteínas
3.8) Electroforesis en geles desnaturalizantes de
poliacrilamida
3.9) Tinción del gel de poliacrilamida
3.9.1) Tinción con azul de Coomassie
3.9.2) Tinción con plata
3.10) Inmunoelectrotransferencia
3.11)Precipitación con sulfato de amonio de
anticuerpos anti-ratón de cabra
3.12) Purificación de anticuerpo anti-ratón de cabra
por cromatografía de afinidad
3.13) Acoplamiento de anticuerpos anti-ratón de cabra
a Sepharose 4B

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3.14) Determinación del isotipo del anticuerpo
monoclonal
3.15) Semipurificación del anticuerpomonoclonal por
medio de cromatografía liquida rápida de
proteínas
3.16) Adsorción y entrecruzamiento del anticuerpo
monoclonal a la columna de Sepharose 4B con
anticuerpo anti-ratón acoplado
3.17) Obtención de extracto total de amiba para
cromatografía de afinidad
3.18) Cromatografía de afinidad
3.19) Inhibición de eritrofagocitosis
I7) RESULTADOS
4.1) Inmunofluorescencia indirecta detrofozoítos
de ~ histolytica
4.2) Patrón electroforético de proteínas de las
clonas de ~ histolytica
4.3) Inmunoelectrotransferencia de proteína total de
las clonas de ~ histolytica
4.4) Determinación del isotipo del anticuerpo
monoclonal inhibidor de la fagocitosis
4.5) Semipurificación del anticuerpo monoclonal del
líquido ascítico
4.6) Adsorción y entrecruzamiento del anticuerpo
monoclonalsemipurificado con el anticuerpo
anti-ratón acoplado a Sepharose 4B
4.7) Cromatografía de afinidad usando el anticuerpo
monoclonal inhibidor de la fagocitosis
4.8) Ensayos de inhibición de eritrofagocitosis
empleando la fracción eluida de la columna de
afinidad

V) DISCUSION
\~)

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65

CONCLUSIONES

75

REFERENCIAS

77\~I)

v~II)

TABLAS Y FIGURAS

L{) CARTA DE ACEPTACION DEL TEMA DE TESIS
X) CARTA DE VISTO BUENO DEL DIRECTOR DE LA TESIS

1

INTRODUCCION

1.1) Generalidades

El protozoario Entamoeba histolytica es el agente causal de
la amibiasis

humana,

la cual

es

una

de

las

enfermedades

infecciosas más importantes en México y en general en los
países

vías

en...