Ing. Bioquimico

en cuenta tanto el material de partida como su posterior utilización:
Material biologico de partida-tipo de organismo: En el caso de órganos u otros tejidos
animales, es necesario disgregarlosantes de proceder a la lisis celular, ya que las células se
encuentran rodeadas de tejido conectivo. En general estas técnicas involucran la utilización de
enzimas (como por ejemplo colagenasa) y/ouna ruptura mecánica grosera. Para esto pueden
utilizarse morteros, homogeneizadores eléctricos, tijeras o tamices metálicos (mesh), entre otros.
Cuando el material es un cultivo celular, laextracción puede realizarse adicionando un
detergente, realizando un shock osmótico, o por sonicación.
Finalidad del extracto proteico: esto determinará el buffer de extracción que se utilizarádependiendo se desea o no que las proteínas conserven su actividad biológica, su conformación
nativa, su interacción con otras proteínas u otras moléculas. Algunos protocolos son tan violentos
queinvolucran la ruptura de todas las membranas; otros en cambio permiten fraccionar y obtener,
distintos componentes subcelulares (núcleos, mitocondrias, etc).
La extracción de proteínas celularescomienza siempre con una ruptura celular o lisis. Los
métodos más utilizados se basan esencialmente en la homogenización de los tejidos y la
destrucción de los límites celulares por medio dediferentes procedimientos físicos y/o químicos.
Obteniéndose lo que se denomina extracto crudo. Los objetivos a lograr en esta etapa son
maximizar la liberación de las proteínas de interés, evitando ladegradación térmica o las
alteraciones secudarias por oxidación, proteólisis, etc. Se han desarrollado una amplia gama de
técnicas de disrupción celular, que se usan a escala de laboratorio que sepueden clasificar como:
a) métodos físicos mecánicos: agitación con abrasivos, homogeneización a alta presión o
extrusión por presión; b) métodos físicos no mecánicos: shock osmótico, ciclos de...