Ing. Genética

DNA en una botella.
Procedimiento:
Nos lavamos higiénicamente la boca para evitar la contaminación del DNA. Posteriormente nos enjuagamos la boca por 30 segundos con 3mL de agua, mordisquear cuidadosamente las mejillas. Y pusimos el líquido en el tubo.
Añadimos 2 microL del búfer de lisis, para romper las membranas celulares.
Cerramos el tubo e invertimos suavemente para mezclar loscomponentes. La solución se tornó turbia.
Se agregaron 5 gotas de lisozima, para realizar la proteólisis de las proteína como las endonucleasa, así como las que empaquetan el DNA, cerramos el tubo y se mezcló cuidadosamente por inmersión.
Se agregó la solución salina para promover la aglomeración del material genético y alcohol frio para inducir la precipitación del mismo. Observamos hebras blancasen el tubo las cuales se aglomeraban y formaban bolitas en el centro del tubo.
Posteriormente con ayuda de una pipeta de plástico extrajimos una parte del material genético del tubo para colocarlos en bulbos de cristal, los tapamos de un extremo y le colocamos la correa para hacer nuestros collares.
El resto de DNA lo guardamos a -20 grados para correr un gel.


Figura 1. DNA en una botella.Con esta práctica aprendimos una de las técnicas para extraer DNA. Fue interesante conocer las propiedades de cada uno de los componentes que usamos y observar que incluso con productos caseros como jabón y ablandador de carnes, se puede realizar una extracción exitosa. Esta práctica es de suma importancia ya que permite comprender mejor lo visto en la teoría.

Figura 2. Electroforesis en gel deagarosa. DNA genómico.
Utilizando Syber safe en lugar de bromuro de etidio para correr nuestro gel, disminuímos en un alto grado a toxicidad.
En el gel podemos observar dos carriles por donde corrieron las muestras de nuestro DNA. Claramente se observan un par de bandas que pertenecen a nuestro DNA. Sin embargo, se nota claramente el barrido por todo el carril que significa que se ha empezado adegradar.

Investigación de la escena del crimen, fundamentos de la PCR
Procedimiento
Se colocaron en hielo los tubos del kit marcados con un color diferente para cada muestra, hasta que se descongelaran:
Morado SC = Escena del crimen
Verde A = Sospechoso 1
Azul B = Sospechoso 2
Anaranjado C = Sospechoso 3
Rosa D = Sospechoso4
Se colocaron en la mezcla de reacción:
10 μl de cada muestra de ADN correspondiente y las identificamos para no confundirlas, teniendo cuidado de ver que la muestra se quedara en el tubo.
10 μl de la mezcla de Mater Mix con los primers (MMP)
Después de realizar la mezcla de forma adecuada, se colocaron los tubos en el termociclador para comenzar la amplificación:

94 ° C 2 min X1para desnaturalizar la cadena de DNA.
94 ° C, 30 seg 
52°C 30 seg X35 ciclos para que los primers se alineen con el DNA templado
según su Tm.
72 ° C, 1 min para que la Taq polimerasa actué y amplifique el DNA.


Figura 3. Ciclos de amplificación.
Tiempo aproximado 3hrs-4hrs.
Se realizó la electroforesis de losproductos de la PCR
 
1.-Se elaboró un gel de agarosa al 3% para la separación de fragmentos de DNA 
Se realizó en una base normal de electroforesis, se calentó la agarosa con el colorante sybersafe (Sigma) y se colocó en esta base, una vez solidificado se cargaron las muestras y una vez cargadas las muestras, se colocaron en la cámara de electroforesis, la cual ya contenía el tae 0.25x paracomenzar la separación.

A continuación se muestra el frente de corrida que demuestra que el sospechoso es el C esto debido a que tiene el mismo patrón de bandas que la escena del crimen. Sin embargo, esto no permite declararlo culpable, pues, no son pruebas suficientes de que lo sea.

Figura 4. Frente de corrida de la escena del crimen.
Con la práctica aprendimos algunas de las prácticas...