ingenieria genetica


UNIVERSIDAD LIBRE DE COLOMBIA SECCIONAL BARRANQUILLA ATLANTICO


FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD
PROGRAMA DE MEDICINA


AREA BASICA BIOLOGIA MOLECULAR
LABORATORIO DE BIOLOGIA MOLECULAR
DRA. DIANA CAVANZO

EXTRACCION DE ADN BACTERIANO


INTEGRNATES:
JESUS CORONADO CUENTAS
STAFTHANY SALCEDO SANTIAGO
ELIANA SALTARIN RAMOS



III SEMESTRE GRUPO A
2011
DIFERENCIA ENTREEXTRACCION DE ADN GENOMICO Y PLASMIDIO
Extracción de ADN genómico:
1. Lisis:
Extracción de ADN genómico es el más simple de los dos procedimientos, porque todo lo que se necesita es una buena y sólida lisis para liberar el ADN genómico en la solución. Las células de levadura de plantas y bacterias, se trata de derribar el muro fuerte, celular rígido antes de interrumpir mecánicamente lamembrana. La pared celular que normalmente se puede dividir el uso de enzimas como la lisozima, que cataliza la hidrólisis de los peptidoglicanos de la pared celular y la serina proteasa, proteinasa K (y por Gram + especies, lysostaphin). 
Un método más universal de la lisis para la extracción de ADN genómico implica mecánicamente romper la pared celular. Un método de este late cordón, que se puedenrealizar fácilmente en un vórtice con cuentas de vidrio 0,1 mm o 0,15 mm perlas granate bien. Adaptadores especiales vórtice ayudar con la realización de extracciones múltiples, al mismo tiempo con la misma eficacia. Golpes de bolas es más rápido que la lisis enzimática y, en general más completa.
2. purificar
Una vez que la muestra ha sido lisadas para lo que el ADN genómico en la solución, todo loque se necesita es purificar la muestra. Esto se puede lograr utilizando fenol-cloroformo o un giro membranas de filtro mediante la adición de sales de guanidina que promueven la unión a la sílice.
3. Datos curiosos
El cromosoma se va a romper durante la purificación, ya que es demasiado grande para permanecer en una sola pieza. Pero para la mayoría de las aplicaciones esto no es un problema ypara la PCR cuantitativa, la rotura será una ventaja ya que permite una mejor fusión del ADN y provocar una reacción más eficiente.
El cromosoma de E. coli es 4638, 858 pb y esto viene a alrededor de 0.005 picogramos por célula. En un cultivo de una noche típica de partido de una sola colonia, el número de bacterias alrededor de 1-2 x 109 bacterias / ml. Esto significa que 1 ml de la cultura debeproducir alrededor de 5 ug de ADN genómico por 109 bacterias.


Extracción de ADN plásmido
La extracción de ADN plásmido es un poco más complicado, ya que consiste en separar el plásmido del ADN genómico. La separación de las dos formas de ADN se basa en el tamaño y la diferencia está en el método de lisis.
1. Lisis alcalina
Para la extracción de ADN de plásmido, la lisis tiene que ser muchomás sutil que simplemente masticando la pared celular con enzimas o golpear con cuentas de vidrio. El método (casi) universal para la extracción de ADN plásmido fue inventado por Birnboim y Doly en 1979.
El tampón de lisis contiene hidróxido de sodio y el desarrollo sostenible, con el propósito de que es desnaturalizar completamente del ADN plasmídico y genómico (es decir, separar el ADN enhebras simples). Es muy importante que este paso se lleve a cabo rápidamente, porque demasiado tiempo en las condiciones de desnaturalización de esta solución puede resultar en el plásmido irreversiblemente desnaturalizado al final.
A continuación la muestra se neutraliza con una solución de acetato de potasio para renature el plásmido. Esta es la clave para la separación del ADN plásmido y genómica.Debido a que el plásmido es pequeño, se puede fácilmente volver a templar. Sin embargo, el ADN genómico es demasiado largo para volver a recocer correctamente y en su lugar se queda atrapado por lo que la cortesía hebras se mantienen separadas.
Cuando la muestra se centrifuga, el ADN genómico es aún une a las proteínas y se tira hacia abajo, mientras que el plásmido de ADN es soluble y...