Ingenieria

Perlas de vidrio vortex

1 .- Consideraciones generales
Vortex con cuentas de cristal es de alguna manera una extensión del método de molienda de la lisis celular. La acción abrasiva de lascuentas vortex corta las paredes celulares, liberando el contenido citoplasmático. Este método se utiliza principalmente en organismos unicelulares, particularmente las levaduras. El método descrito es paramuestras pequeñas (de hasta 3 g) y puede llevarse a cabo en un tubo de ensayo. Para muestras más grandes, aparatos especializados se han desarrollado y que se enumeran a continuación.
2. Pasosespecíficos
Protocolo
1. Suspenda de nuevo la célula lavada g 0.1 - 3 en un volumen igual de almacenador intermediario de la lisis y coloqúela en un tubo resistente (preferiblemente que no sea de vidriopuesto que se puede romper debido a la acción de las cuentas de cristal). Un tubo de Eppendorf funciona bien para las pequeñas muestras.
2. - Agregue 1 - 3 g de cuentas de cristal enfriados por elgramo de peso mojado de la célula.
3. - Vórtice 3 - 5 veces para un minuto, guardando cada vez las células en el hielo para un minuto entre los vortexings. Utilice el ajuste más alto del mezclador delvortex.

Comentarios

1.- Para evitar fugas durante la agitación, los tubos deben cerrarse con un tapón de tuerca que contiene una junta de goma o deben sellarse con Parafilm.

2 .- Este métodose utiliza con más frecuencia con la levadura Saccharomyces.

3 .- Los aparatos que permiten abalorios agitación con grandes cantidades de células incluyen el de vidrio Braun MSK abalorios Mill, elcordón de Productos Biospec-Beater, y el Manton-homogeneizador Gaulin. OTRA (3. - Los aparatos que permiten el grano de cristal vortexing con cantidades más grandes de células incluyen el molino delgrano de cristal de Braun MSK, el Grano-Batidor de los productos de Biospec, y el homogeneizador de Manton-Gaulin)

4 .- bolas de vidrio (500 mm de diámetro) son preparados por el lavado en HCl...