Ingeniero

Determinación de Antocianinas por el método de pH diferencial

Objetivos
1 Conocer el funcionamiento de un espectrofotómetro.
2 Conocer los fundamentos de la espectrometría.
3 Determinar laconcentración de un compuesto de interés mediante la espectrofotometría.


Introducción.

Las antocianinas monoméricas son pigmentos que pueden cambiar de color de manera reversible de acuerdo alcambio de pH en el medio. La forma colorida (como oxonio) existe a un pH ácido (1.0) y la forma descolorida (como hemiacetal) predomina a un pH de 4.5. La diferencia en la absorbancia de los pigmentos a520 nm es proporcional a su concentración. Los resultados se expresan como equivalentes de cyanidina-3-glucosido. Las antocianinas en forma polimérica son resistentes al cambo de color pHdependiente, por lo que no son incluidas dentro de la cuantificación ya que muestran absorbancia a ambos pH, tanto 4.5 como 1.



Materiales y Reactivos

Materiales
Cantidad
Reactivos
CantidadCeldas para espectrofotómetro
20
Agua destilada
--
Matraz volumétrico de 50 mL
4
Cloruro de potasio
1.86 g
Vaso de precipitados de 250 mL
4
HCl
20 mL
Vaso de precipitado de 500 mL
1Acetato de sodio
54.43 g
Vaso de precipitado de 1 L
1
Col morada
350 g
Probeta de 10 mL
1
Bicarbonato de sodio
5 g
Probeta 50 mL
1


Matraz volumétrico de 1000 mL
2
Equipo
Cantidad
Pipetagraduada de 10mL
2
Parrilla de calentamiento
1
Pipeta graduada de 5 mL
2
Potenciómetro
1
Propipetas

Espectrofotómetro
1
Cuchillo
1







Procedimiento experimental

1.Preparación del concentrado de antocianina
a) Cortar en trozos pequeños la col morada.
b) En un vaso de precipitado de 500 mL poner la col morada y cubrir con agua destilada.
c) Hervir durante 10 min. Sies necesario añadir un poco más de agua.
d) Dejar enfriar y decantar el líquido o un vaso de precipitado.

2. Reactivos
Buffer pH 1.0 (Cloruro de potasio 0.025 M)
a. Pesar 1.86 g de KCl,...