Inmovilización lactasa
Páginas: 35 (8602 palabras)
Publicado: 30 de diciembre de 2011
INMOVILIZACIÓN DE E-GALACTOSIDASA EN ALGINATO DE CALCIO Universidad Nacional de Colombia, Facultad de Ciencias, Departamento de Química. Laboratorio de Bioquímica (para la carrera de Química)
1. OBJETIVOS 1.1 x Objetivo general: Comprender los fundamentos de la inmovilización de enzimas, realizar un diseño experimental con el fin de llevar a cabo la inmovilización de E-galactosidasa en unsoporte de alginato y estudiar sus efectos sobre la actividad de la misma. Objetivos específicos: x Realizar el estudio de la actividad enzimática de la lactasa libre e inmovilizada utilizando como sustrato el ONPG (orto-nitrofenil-E-galactopiranósido), midiendo con un método colorimétrico el ONP (orto-nitrofenol) producido. Verificar el efecto de la temperatura, el pH, la concentración de la enzima yla concentración del sustrato, en la actividad de la enzima, tanto libre como inmovilizada. Determinar el efecto de la inmovilización sobre la actividad enzimática de la E-galactosidasa.
1.2
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2. INTRODUCCIÓN La lactosa, E-D-galactopiranosil-(1 4)-D-D-glucopiranosa, es el único azúcar presente en la leche de todos los mamíferos. La cantidad en la que se puede encontrar es variable,siendo por ejempli en la leche humana no más del 6,7% de ésta, mientras que en la de la vaca, aproximadamente un 4,5%. Por poseer un carbono anomérico libre es un azúcar reductor. Cabe señalar que el poder reductor de la lactosa es más débil que el de la glucosa, pero aumenta considerablemente cuando es hidrolizada. Tiene la característica de ser altamente higroscópica con una fuerte tendencia aadsorber olores y sabores.
Figura 1. Representación de la lactosa.
Figura 2. Diferencia entre un disacárido reductor y uno no reductor.
La lactosa es un ingrediente muy importante en la industria farmacéutica y alimentaria y se utiliza de diversas formas: x En la industria farmacéutica se usa como diluyente de los principios activos, en la fabricación de comprimidos y cápsulas. Esprácticamente inerte y por lo tanto compatible con diversas sustancias farmacológicamente activas, convirtiendo a la lactosa en el excipiente ideal en muchas aplicaciones. En la industria alimentaria se utiliza entre otras cosas, en la fabricación de alimentos para lactantes, ya que se hidroliza más fácilmente que la sacarosa. Es menos dulce y ayuda a restablecer la microflora intestinal, por proporcionarun medio adecuado a los lactobacilos. También se utiliza para la manufacturación de gran número de productos no lácteos (panes, cereales, bebidas, salsas, etc.)
x
Los hidratos de carbono representan la principal fuente de energía para el organismo, alrededor del 50-60% de las calorías de dieta diaria. El consumo de leche es muy importante, siendo los humanos los únicos mamíferos quecontinúan ingiriendo leche luego de la etapa de lactancia, aún cuando ya no es un alimento indispensable. El aporte calórico de la lactosa es muy importante en la primera infancia, ya que durante este periodo los carbohidratos ingeridos representan 35-50% del total de calorías de la dieta y en esta fase inicial de la nutrición, el azúcar exclusivo es la lactosa, procedente de la leche de la madre o deleches de fórmula adaptada. La lactasa enzima que se localiza en la superficie apical de la membrana en cepillo de los eritrocitos, donde está anclada a la membrana por su extremo C-terminal y tiene la mayor parte de la molécula proyectándose hacia el intestino. La expresión de la lactasa, tanto en humanos como en animales, está regulada por un patrón especial complejo y de desarrollo en el intestinodelgado. Algunas de las características del patrón de la expresión de la lactasa se han elucidado en las últimas décadas utilizando modelos animales y de culturas de células intestinales. Se demostró que la expresión de la lactasa después del destete es fragmentaria en la parte distal del intestino delgado en los conejos. El mismo fenómeno se encontró en los individuos con hipolactasia de...
1. OBJETIVOS 1.1 x Objetivo general: Comprender los fundamentos de la inmovilización de enzimas, realizar un diseño experimental con el fin de llevar a cabo la inmovilización de E-galactosidasa en unsoporte de alginato y estudiar sus efectos sobre la actividad de la misma. Objetivos específicos: x Realizar el estudio de la actividad enzimática de la lactasa libre e inmovilizada utilizando como sustrato el ONPG (orto-nitrofenil-E-galactopiranósido), midiendo con un método colorimétrico el ONP (orto-nitrofenol) producido. Verificar el efecto de la temperatura, el pH, la concentración de la enzima yla concentración del sustrato, en la actividad de la enzima, tanto libre como inmovilizada. Determinar el efecto de la inmovilización sobre la actividad enzimática de la E-galactosidasa.
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2. INTRODUCCIÓN La lactosa, E-D-galactopiranosil-(1 4)-D-D-glucopiranosa, es el único azúcar presente en la leche de todos los mamíferos. La cantidad en la que se puede encontrar es variable,siendo por ejempli en la leche humana no más del 6,7% de ésta, mientras que en la de la vaca, aproximadamente un 4,5%. Por poseer un carbono anomérico libre es un azúcar reductor. Cabe señalar que el poder reductor de la lactosa es más débil que el de la glucosa, pero aumenta considerablemente cuando es hidrolizada. Tiene la característica de ser altamente higroscópica con una fuerte tendencia aadsorber olores y sabores.
Figura 1. Representación de la lactosa.
Figura 2. Diferencia entre un disacárido reductor y uno no reductor.
La lactosa es un ingrediente muy importante en la industria farmacéutica y alimentaria y se utiliza de diversas formas: x En la industria farmacéutica se usa como diluyente de los principios activos, en la fabricación de comprimidos y cápsulas. Esprácticamente inerte y por lo tanto compatible con diversas sustancias farmacológicamente activas, convirtiendo a la lactosa en el excipiente ideal en muchas aplicaciones. En la industria alimentaria se utiliza entre otras cosas, en la fabricación de alimentos para lactantes, ya que se hidroliza más fácilmente que la sacarosa. Es menos dulce y ayuda a restablecer la microflora intestinal, por proporcionarun medio adecuado a los lactobacilos. También se utiliza para la manufacturación de gran número de productos no lácteos (panes, cereales, bebidas, salsas, etc.)
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Los hidratos de carbono representan la principal fuente de energía para el organismo, alrededor del 50-60% de las calorías de dieta diaria. El consumo de leche es muy importante, siendo los humanos los únicos mamíferos quecontinúan ingiriendo leche luego de la etapa de lactancia, aún cuando ya no es un alimento indispensable. El aporte calórico de la lactosa es muy importante en la primera infancia, ya que durante este periodo los carbohidratos ingeridos representan 35-50% del total de calorías de la dieta y en esta fase inicial de la nutrición, el azúcar exclusivo es la lactosa, procedente de la leche de la madre o deleches de fórmula adaptada. La lactasa enzima que se localiza en la superficie apical de la membrana en cepillo de los eritrocitos, donde está anclada a la membrana por su extremo C-terminal y tiene la mayor parte de la molécula proyectándose hacia el intestino. La expresión de la lactasa, tanto en humanos como en animales, está regulada por un patrón especial complejo y de desarrollo en el intestinodelgado. Algunas de las características del patrón de la expresión de la lactasa se han elucidado en las últimas décadas utilizando modelos animales y de culturas de células intestinales. Se demostró que la expresión de la lactasa después del destete es fragmentaria en la parte distal del intestino delgado en los conejos. El mismo fenómeno se encontró en los individuos con hipolactasia de...
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