Inmovilizacion De La Pepsina En El De Alginato
Páginas: 12 (2840 palabras)
Publicado: 22 de septiembre de 2011
Inmovilización de la pepsina utilizando como soporte un gel alginato de calcio
Fernando A. Álvarez Quintero Cód. 174418
Brian O. Martínez Rojas Cód. 174448
Laboratorio de Bioquímica
Universidad Nacional de Colombia
Departamento de Química
Facultad de Ciencias
Bogotá, Colombia
Objetivos
1. Evaluar la actividad enzimática de la pepsina utilizando como sustrato hemoglobina.2. Estudiar la cinética enzimática de la pepsina libre frente al sustrato de hemoglobina.
3. Inmovilizar la enzima en un gel de alginato de calcio.
4. Realizar estudios cinéticos de la actividad de la enzima inmovilizada
5. Evaluar los distintos parámetros enzimáticos de la Pepsina ( pH, temperatura, tiempo, concentración de enzima y sustrato óptimo)
6. Evaluar los parámetroscinéticos de la pepsina en función del tiempo y realizar una comparación respecto a la literatura para la pepsina libre e inmovilizada.
Introducción
La pepsina [E.C 3.4.23.1][1] corresponde a una enzima monomérica proteolítica, esta enzima es segregada como un zimógeno en forma inactiva denominado pepsinógeno, el cual, debido a las condiciones acidas del estomago este precursor es activadoconllevando a una conversión rápida y completa del pepsinógeno en Pepsina. La pepsina es conocida en forma general debido a las condiciones óptimas trabajo, específicamente esta enzima es conocida como una proteasa acida que corresponden a enzimas proteolíticas con actividad óptima en un intervalo acido. La anterior características de estas enzimas ó en si de la pepsina, es razón principal de lapresencia de 2 residuos reactivos de acido aspártico que se encuentran en el sitio activo de la enzima. Específicamente en la pepsina porcina estos residuos de aminoácidos se encuentran presentes en la posición 32 y 215 de la secuencia de aminoácidos.
La pepsina recibe la clasificación [E.C 3.4.23.1], esto representa que la actividad de esta enzima reside en la Hidrolisis (3) de enlaces peptídicos(Péptidasa, 4) realizada por residuos de acido aspártico. La pepsina es una enzima que actúa sobre sustratos proteínicos rompiendo los enlaces de tipo peptidicos que conforman al sustrato degradándolo y obteniendo moléculas más pequeñas como péptidos, oligopeptidos, entre otros. Se ha encontrado que su actividad es preferencial por los enlaces peptidicos que se encuentran al interior de laproteína y por tanto la pepsina es reconocida como una endopeptidasa, lo cual requiere la desnaturalización previa del sustrato sobre el cual va a actuar. A nivel biológico esta enzima se halla presente en el jugo gástrico del sistema digestivo de la mayoría de animales y del ser humano para garantizar la degradación de las proteínas y obtener así su poder energético (Transcendental en el procesodigestivo), igualmente el jugo gástrico presenta un pH acido el cual garantiza la previa desnaturalización de las proteínas y así lograr la actividad óptima de la pepsina.
Así mismo se ha encontrado que la pepsina posee una especificidad muy amplia, pero ataca preferentemente a los enlaces peptídicos en los que intervienen con los aminoácidos aromáticos (fenilalanina, triptófano y tirosina), así comometionina y leucina, péptidos pequeños, pero muy pocos aminoácidos libres.[2]
La pepsina es ampliamente estudiada debido a su gran importancia a nivel biológico, la enzima más estudiada es la denominada pepsina porcina. Esta pepsina tiene una masa molecular promedio 35, 000 dalton. El punto isoeléctrico de la pepsina está reportado entre 2,25 y 2,85 debido a la gran número presentes deresiduos de acido aspártico y acido glutámico, los cuales con los que le confieren la estabilidad de la enzima a un pH bastante bajo.
[pic]
Figura 1. Esquema de la estructura tridimensional de la pepsina humana (Homo sapiens)[3]
La pepsina presenta las siguientes características en cuanto a parámetros enzimáticos y cinéticos se refiere:
|Parámetro |Valor...
Fernando A. Álvarez Quintero Cód. 174418
Brian O. Martínez Rojas Cód. 174448
Laboratorio de Bioquímica
Universidad Nacional de Colombia
Departamento de Química
Facultad de Ciencias
Bogotá, Colombia
Objetivos
1. Evaluar la actividad enzimática de la pepsina utilizando como sustrato hemoglobina.2. Estudiar la cinética enzimática de la pepsina libre frente al sustrato de hemoglobina.
3. Inmovilizar la enzima en un gel de alginato de calcio.
4. Realizar estudios cinéticos de la actividad de la enzima inmovilizada
5. Evaluar los distintos parámetros enzimáticos de la Pepsina ( pH, temperatura, tiempo, concentración de enzima y sustrato óptimo)
6. Evaluar los parámetroscinéticos de la pepsina en función del tiempo y realizar una comparación respecto a la literatura para la pepsina libre e inmovilizada.
Introducción
La pepsina [E.C 3.4.23.1][1] corresponde a una enzima monomérica proteolítica, esta enzima es segregada como un zimógeno en forma inactiva denominado pepsinógeno, el cual, debido a las condiciones acidas del estomago este precursor es activadoconllevando a una conversión rápida y completa del pepsinógeno en Pepsina. La pepsina es conocida en forma general debido a las condiciones óptimas trabajo, específicamente esta enzima es conocida como una proteasa acida que corresponden a enzimas proteolíticas con actividad óptima en un intervalo acido. La anterior características de estas enzimas ó en si de la pepsina, es razón principal de lapresencia de 2 residuos reactivos de acido aspártico que se encuentran en el sitio activo de la enzima. Específicamente en la pepsina porcina estos residuos de aminoácidos se encuentran presentes en la posición 32 y 215 de la secuencia de aminoácidos.
La pepsina recibe la clasificación [E.C 3.4.23.1], esto representa que la actividad de esta enzima reside en la Hidrolisis (3) de enlaces peptídicos(Péptidasa, 4) realizada por residuos de acido aspártico. La pepsina es una enzima que actúa sobre sustratos proteínicos rompiendo los enlaces de tipo peptidicos que conforman al sustrato degradándolo y obteniendo moléculas más pequeñas como péptidos, oligopeptidos, entre otros. Se ha encontrado que su actividad es preferencial por los enlaces peptidicos que se encuentran al interior de laproteína y por tanto la pepsina es reconocida como una endopeptidasa, lo cual requiere la desnaturalización previa del sustrato sobre el cual va a actuar. A nivel biológico esta enzima se halla presente en el jugo gástrico del sistema digestivo de la mayoría de animales y del ser humano para garantizar la degradación de las proteínas y obtener así su poder energético (Transcendental en el procesodigestivo), igualmente el jugo gástrico presenta un pH acido el cual garantiza la previa desnaturalización de las proteínas y así lograr la actividad óptima de la pepsina.
Así mismo se ha encontrado que la pepsina posee una especificidad muy amplia, pero ataca preferentemente a los enlaces peptídicos en los que intervienen con los aminoácidos aromáticos (fenilalanina, triptófano y tirosina), así comometionina y leucina, péptidos pequeños, pero muy pocos aminoácidos libres.[2]
La pepsina es ampliamente estudiada debido a su gran importancia a nivel biológico, la enzima más estudiada es la denominada pepsina porcina. Esta pepsina tiene una masa molecular promedio 35, 000 dalton. El punto isoeléctrico de la pepsina está reportado entre 2,25 y 2,85 debido a la gran número presentes deresiduos de acido aspártico y acido glutámico, los cuales con los que le confieren la estabilidad de la enzima a un pH bastante bajo.
[pic]
Figura 1. Esquema de la estructura tridimensional de la pepsina humana (Homo sapiens)[3]
La pepsina presenta las siguientes características en cuanto a parámetros enzimáticos y cinéticos se refiere:
|Parámetro |Valor...
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