Inmuno

Resumen: E-046

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDEST E Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2004

Producción de anticuerpos específicos anti pla2 en conejos
Rodríguez, Juan P. - Leiva, Laura C. - Acosta, Ofelia
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1. Cátedra de Química Biológica I, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales y Agrimensura, U.N.N.E. Av. Libertad 5400, Corrientes. TE 03783 457996 Int 112. e-mail:lcleiva@exa.unne-.edu.ar 2. Cátedra de Patología Médica, Facultad de Ciencias Veterinarias, U.N.N.E. Sgto. Cabral 2139, (3400) Corrientes. Argentina. TE 03783 452753. Int 169 e-mail: patmed@vet.unne.edu.ar

ANTECEDENTES En la intoxicación por veneno de Crotalus durissus terrificus (C.d.t.) de Sud América se presentan efectos sobre sistema nervioso (Vital Brasil, 1972). El veneno constituye un paquete desustancias tóxicas tales como: crotoxina, crotamina, convulsina y giroxina. Tanto la crotamina como la crotoxina son las que causan alteraciones en la neurotransmisión periférica (Habermann, E. and Breithaupt, 1978). La crotoxina, principal componente del veneno, exhibe actividad neurotóxica (Brazil, 1966). Es un complejo formado por dos proteínas unidas de modo no covalente, una básica y otraacídica. El componente básico (crotoxina B) con un pI de 8.6 (Horst et al, 1972) o 9.7 (Breithaupt et al, 1975) es una fosfolipasa A2. Esta enzima puede reproducir todos los efectos farmacodinámicos de la crotoxina aunque a dosis más altas de las requeridas por el complejo crotoxina (Rübsamen et al, 1971; Frenkel-Conrat y Singer, 1956; Habermann y Breithauopt, 1978). El componente acídico (crotoxinaA), denominado crotapotín, con un pI de 3.4-3.7 (Horst et al, 1972; Breithauopt et al, 1974) es un polipéptido que no presenta actividad enzimática ni posee toxicidad. En presencia de la fosfolipasa A2, la proteína acídica, crotapotín forma un complejo en el cual se restablecen las propiedades fisicoquímicas y la alta toxicidad que exhibe la crotoxina, aunque reduce la actividad que exhibe lafosfolipasa A2 cuando está libre (Breithaupt and Habermann, 1972). La crotoxina también presenta actividad hemolítica (Rosenfeld, 1971). Este efecto es debido principalmente a los productos formados por la acción fosfolipásica sobre glicerofosfolípidos, esto es, ácidos grasos y lisofosfolípidos. Los lisofosfolípidos emulsionan los fosfolípidos de la membrana, alterando así la estructura de la membranadel eritrocito, lo que conlleva a la lisis celular. Por lo tanto, se trata de una hemólisis indirecta. El veneno de C. d. t. tiene una letalidad elevada, medida a través de la dosis letal 50 (LD50, cantidad de veneno que produce la muerte del 50% de animales inoculados 48hs antes), correspondiéndole un valor 0,073 µg/g ratón (Santoro et al, 1999), mientras que ensayos realizados en nuestrolaboratorio, correspondientes a especimenes que habitan la región nordeste de Argentina, arrojan una dosis aún menor, de 0,048 µg de veneno por gramo de ratón. La crotoxina es un componente letal, principalmente responsable de la toxicidad del veneno, (Canziani et al 1982) determinaron su LD50 (0,050 + 0,03 µg/g ratón) siendo marcadamente menor que la de la fosfolipasa A2 (crotoxina B) (0,54 + 0,15 µg/gratón). Los sueros actualmente disponibles en el comercio son heterólogos, por lo que están constituidos por gran variedad de inmunoglobulinas capaces de reconocer y neutralizar los distintos componentes del veneno. Si bien este tipo de suero genera una protección inmediata frente a la toxicidad del veneno, puede generar secuelas dado que simultáneamente se convierten en un paquete proteicoexógeno contra los cuales el organismo ha de reaccionar formando inmunocomplejos. Estos complejos pueden depositarse en riñón y desencadenar daño renal a largo plazo. Es de interés producir un suero específico contra el componente letal del veneno a fin de anular su acción y con ello evitar el suministro excesivo de proteínas heterólogas. Teniendo en cuenta que la PLA2 (crotoxina B) posee una...