Inmunocromatografia

INMUNOCROMATOGRAFIA
Técnica
Inmunocromatografia
Modalidad
Directa
Método
Cualitativo
Prueba
Determinación de niveles de la Hormona Gonodotropina Corionica Humana (HGCH)

FUNDAMENTO
Esta técnica es una combinación de dos técnicas básicas. Una meramente inmunológica donde se da la reacción antígeno-anticuerpo y la otra complementaria que permite detectar la señal que nos indica laformación del complejo inmune, para esto se utiliza un coloide conjugado con un anticuerpo que va a aumentar la sensibilidad o la capacidad de detectar el complejo inmune a una mínima concentración dada.
Los coloides son sustancias que dispersas en un solvente, no se disuelven, sino que quedan finalmente divididas en el. Esto se debe al tamaño de la partícula que oscila entre 1 y 500 milimicrones.
Entonces podemos decir que la inmunocromatografia como técnica por nos ofrece la capacidad de detectar complejos inmunes formados, y por otro lado se vale del poder de separación e identificación de compuestos que ofrece la cromatografía.
De una manera general podemos definir la cromatografía como una técnica analítica y preparativa usada en los laboratorios para la separación eidentificación de compuestos químicos. Y es así que podemos utilizar diferentes modalidades de ella, dependiendo de lo que queremos separar y como lo queremos separar.
La prueba inmunocromatografica a realizar es usada para la determinación cualitativa de la hormona gonodotropina corionica humana (HGCH) .Esta es una hormona secretada por la placenta en desarrollo, poco después de la fecundación. Laaparición y el aumento rápido en la concentración de ella en el suero y la orina hacen que sea un indicador excelente para la confirmación del embarazo. Este inmunoensayo utiliza anticuerpos monoclonales y policlonales para identificar la HGCH con alta sensibilidad.







PROTOCOLO









MATERIALES
Disco de reacción HGCH-Combo
Muestra orina Problema
Guantes
Papel toallaMÉTODO

1-Agregar orina en un vial para su análisis.
2-Dejar difundir atreves de la membrana, hasta alcanzar la ventana de finalización del ensayo.
3-Dejar a temperatura ambiente por aproximadamente 4 minutos si la muestra es orina y leer.
















INTERPRETACION Y RESULTADOS

A medida que la orina avanzan a través de la membrana movilizan el complejo antialfa HGCH-coloide atravesando la región de captura del anticuerpo inmovilizado especifico anti beta HGCH y llegando hasta el extremo de la membrana. Si en la muestra esta presente la subunidad beta de la HGCH, esta va a ser capturada y se vera la señal positiva ( I I ) Si se observa la señal negativa ( I ) quiere decir que no esta presente la HGCH.





INMUNOFLUORESCENCIA.
TécnicaInmunofluorescencia
Modalidad
Indirecta (IFI)
Método
Cuantitativo
Prueba
Determinación de niveles -T. cruzi

FUNDAMENTO
La inmunofluorescencia se basa en el empleo de anticuerpos marcados con sustancias fluorescentes como ser el isotiocianato de fluoresceína, el cual es capaz de emitir luz a una mayor longitud de onda, cuando son excitados con luz de rango ultravioleta a un nivel de energíamenor. El ITC de fluoresceína tiene una absorción máxima de 490-495 nm y emite su color verde característico a 517nm.
Existen diferentes modalidades de esta técnica, pero las más empleadas son la directa y la indirecta.
La IF indirecta (realizada en el laboratorio) permite la investigación de anticuerpos en sueros marcados. En la primera etapa de esta técnica se hace reaccionar el suero problemacon el antígeno previamente preparado. Después de esto, se lava la preparación para eliminar los anticuerpos que no reaccionaron con el antígeno, se agrega un suero -IgGh marcado con fluorocromo (ITC de fluoresceína), el cual reaccionará con los anticuerpos que se estén investigando, los cuales, poseen más sitios de unión para el segundo anticuerpo que los que tiene el antígeno, con lo cual se...