Inmunodifusion

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Inmunodifusión doble de Ouchterlony

Patrón de Ouchtherlony demostrando no identidad.
La inmunodifusión doble de Ouchterlony es un método inmunológico sencillo y rutinariamente usado en el laboratorio clínico para la detección de antígenoso anticuerpos en una muestra biológica. Es considerado el proceso estándar para la detección de AntígenosNucleares Extraibles (ENA).
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[editar]Procedimiento

Patrón de Identidad en una placa de Ouchtherlony.
Sobre una placa con gel se corta una serie de hoyos con atención a la geometría entre un hoyo y los demás. Se coloca un extracto de células humanas (extraídas de tejido de las amígdalas) en el pocillo del centro. Este extracto contieneun cóctel de antígenos humanos naturales que se quiere obtener. El suero sanguíneo del paciente es colocado luego en uno de los pocillos exteriores y la placa se deja por 48 horas para su revelado. Durante este tiempo, los antígenos de las amígdalas y los anticuerpos en el pocillo del suero migrarán de manera radial hacia afuera de sus respectivos pocillos. Al encontrarse ambos a mitad de camino y, de haberanticuerpos en contra de los antígenos toncilares, se unirán en una red de enlaces llamado complejo inmune, el cual precipita en el gel revelando una línea blanquecina.
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[editar]Principio

Patrón de Identidad Parcial en una placa de Ouchtherlony.
La precipitación ocurre con la mayoría de los antígenos, debido a que éstos tienden a sermultivalente, es decir, tienen varios determinantes antigénicos pormolécula, al que los anticuerpos pueden enlazarse. Cada anticuerpo, a su vez, tiene por lo menos dos sitios de unión para los antígenos, de modo que se entrecruzan formando una gran matriz de agregados antígeno:anticuerpo.
Experimentalmente, una cantidad de antígeno se añade de manera incrementada a una cantidad constante de anticuerpoen solución. Inicialmente, a una baja concentración, todo el antígeno participa en el precipitado, lo cual se conoce como una zona de exceso de anticuerpo o fenómeno de prozona.
A medida que se añade más antígeno, la cantidad de proteína que precipita, aumenta hasta que las moléculas de antígeno:anticuerpo alcanzan una proporción óptima, llamada zona de equivalencia.
La zona de exceso se logracuando la concentración del antígeno excede a la de los anticuerpos, y la cantidad de precipitación disminuye.
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[editar]Interpretación
El precipitado que se forma al combinarse el antígeno con los anticuerpos pueden forman una línea contínua llamada identidad completa, una línea contínua con un espolón en un lado llamado línea de identidad parcial, obien dos líneas que se entrecruzan llamadas líneas de no-identidad. El tipo de línea que se forma dictará si el paciente tiene alguna forma del anticuerpo que puede estar asociado a un proceso de enfermedad.
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Inmunodifusión radial
La inmunodifusión radial es una técnica de análisis inmunológico de tipo cuantitativo. Se utiliza para detectar lacantidad de anticuerpos IgG, IgM e IgA que hay en el suero de un individuo.
La técnica de inmunodifusión radial es lenta y poco sensible ya que necesita mucha cantidad de anticuerpos (o antígeno) para que se formen complejos.
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[editar]Técnica
El antígeno en suspensión se mezcla con agar-agar en estado líquido y luego éste se vierte sobre unaplaca (generalmente un portaobjetos de microscopía). Una vez solidificado, con una pipetaPasteur se hacen agujeros (pocillos) que contendrán la muestra de suero. Se deja incubar de modo que el suero con anticuerpos se difunde por la placa de agar y reacciona con el antígeno embebido en la placa. Al cabo de 24 horas se ha creado un precipitado fruto de la reacción entre antígeno y anticuerpo que...