inmunofluorescencia

Inmunofluorescencia

¿Que acción tiene el Azul de Evans en la inmunofluorescencia?
El azul de Evans es un colorante soluble en agua, usado como medio de diagnóstico en la lectura de la reacciónantígeno-anticuerpo, siendo empleado como medio de contraste. Esto se realiza con un microscopio de fluorescencia, en los controles y/o pruebas positivas se aprecian los patrones nucleares con unafluorescencia intensa y bien definida; el resto del tejido se observara con un tono pardo rojizo dado por este colorante de contraste azul de Evans y zonas con un tono verde claro y brillante por lafluorescencia de fondo u otro tono dependiendo del tipo del fluorocromo utilizado.

¿Cómo se titula un conjugado de inmunofluorescencia?
En la inmunofluorescencia se utilizan anticuerpos específicosmarcados con un fluorocromo, que es una sustancia que al ser excitada con una onda de luz corta, emite otra longitud de onda más larga, que puede ser observada, y medida por fotometría. En lainmunofluorescencia directa, este conjugado se aplica sobre el material, tejido o muestra que se quiere examinar; y en la indirecta la muestra se cubre primero con suero del paciente (contra el antígeno),luego se lava y hay si aplicamos el anticuerpo antisuero humano, (el cual es obtenido mediante la inmunización en animales), conjugado con el fluorocromo.

Conjugación

Se añade al suero unamortiguador o tampón carbonato de sodio 0,2 mol/L pH 9,5 o carbonato-bicarbonato para mantener condiciones óptimas de pH (9.0) (se debe tener en cuenta el pH adecuado para el fluorocromo a usar); se agita enbaño de hielo añadiendo el fluorocromo en un período determinado de tiempo, luego se aplica el anticuerpo teniendo en cuenta su concentración mediante tratamiento con sales de amonio saturado y sepurifica mediante eliminación de las sales amortiguadoras y los elementos utilizados como solventes del fluorocromo (acetona) por medio de diálisis. Se utiliza extracción con carbón o filtración en...