Inmunohistoquimia

TEMA 17 INMUNOHISTOQUÍMICA
• METODOS INMUNOHISTOQUÍMICOS.
Sirven para detectar antígenos celulares o titulares mediante la reacción antígeno − anticuerpo. Para visualizar
el lugar donde se produce la reacción antígeno − anticuerpo es preciso emplear un trazador o marcador.
El marcaje puede realizarse con fluorocromos (técnicas de inmunofluorescencia), técnicas inmunoencimática
o tambiénpueden ser iones metálicos en forma coloidal (técnica de inmuno − oro), y el último marcador son
isótopos radioactivos.
2. TECNICAS INMUNOHISTOQUÍMICAS
2.1. Fundamentos:
La fluorescencia es una forma de luminiscencia entendiéndose ésta última como la emisión de la luz que se
produce a partir de una fuente de energía no térmica y bajo el efecto de una excitación.
La fluorescencia primaria oautofluorescencia es aquella que presenta determinadas sustancias de forma
espontánea sin necesidad de ser modificadas; por ejemplo la lámina elástica de las arterias muestra
autofluorescencia en determinadas condiciones).
En los tejidos que no poseen esta propiedad se puede inducir la fluorescencia, llamándola fluorescencia
secundaria, esto se puede hacer mediante tinción histoquímica consustancias fluorescentes llamadas
fluorocromos o uniendo fluorocromos a antígenos dirigidos a anticuerpos tisulares. De este último
procedimiento se sirven las técnicas de inmunofluorescencia.
2.2. Fluorocromos.
Son sustancias químicas que tienen la propiedad de absorber fotones de alta energía procedente de la radiación
ultravioleta o del espectro visible. Ello provoca una redistribución de loselectrones de las moléculas
fluorescentes, puesta de manifiesto por la emisión de una radiación luminosa de longitud de onda distinta
auque dentro del espectro visible.
Si al iluminar una sustancia con luz visible ocurre un fenómeno similar al descrito y la liberación de energía
se produce de forma gradual, prolongándose la emisión de luz después de cesar la iluminación del objeto, este
fenómenose llama fosforescencia.
Los fluorocromos más utilizados en las técnicas de inmunofluorescencia son:
• Fluoresceína: absorbe luz azul y emite fluorescencia verde manzana.
• Rodamina: absorbe luz verde y emite fluorescencia roja anaranjada.
Los fluorocromos pueden unirse de forma covalente a los anticuerpos sin alterar la capacidad de estos últimos
para unirse a sus correspondientes antígenos,por ello las fluorocromos ligados a anticuerpos específicos
constituyen un medio útil de visualizar los lugares donde reproduce la reacción Antígeno − Anticuerpo.
2.3. Preparación del tejido para inmunofluorescencia.
Las técnicas de inmunofluorescencia se realizan casi siempre sobre tejido congelado, porque el procedimiento
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de fijación en formol e inclusión en parafina presentanumerosos inconvenientes para el desarrollo de estos
métodos.
Entre los inconvenientes figuran el aumento de los fenómenos de autofluorescencia y el bloqueo de gran
cantidad de determinantes antigénicos provocados por los agentes fijadores.
2.4. Tipos de técnicas de inmunofluorescencia
• En la técnica de inmunofluorescencia directa se utiliza un anticuerpo específico frente al antígeno
que se deseadetectar. Dicho anticuerpo está ligado a un fluorocromo.
• En las técnicas de inmunofluorescencia de tipo indirecto se emplea en un primer paso el anticuerpo
específico no marcado y en una segunda fase un anticuerpo marcado con el correspondiente
fluorocromo que reacciona de forma específica con el anticuerpo primario.
• Otros procedimientos técnicos de inmunofluorescencia bastante menosutilizados que los anteriores
son:
⋅ La técnica de sándwich: que se emplea para detectar la presencia de
inmunoglobulinas específicas frente a un determinado antígeno en las células
de tejidos pertenecientes a un animal previamente inmunizado con ese
antígeno. Para ello se toman secciones de ganglio linfático procedentes del
animal inmunizado, se añade el antígeno en un primer paso y después un...