Inmunohistoquimica

VI. TÉCNICA INMUNOHISTOQUIMICA
Conjunto de técnicas que hacen uso de anticuerpos. Los anticuerpos están formados por dos cadenas pesadas y dos ligeras, que se agrupan en una molécula en forma de Y,con dos sitios de unión para antígeno

Existen varios tipos de anticuerpos, de los cuales los IgG son los más abundantes en suero y los que más utilidad tienen en técnicas de laboratorio.Antígeno es la molécula a la cual se une el anticuerpo. Son de muy distinta naturaleza. Fundamentalmente los Ac reconocen proteínas, pero también se sintetizan Ac contra carbohidratos, lípidos, ac. nucleicos,compuestos orgánicos sintéticos, etc. La región de la molécula a la cual se une el anticuerpo se denomina epítopo. Los epítopos pueden estar formados por regiones contiguas o no en la secuencia deaminoácidos de una proteína.
La unión antígeno-anticuerpo es una unión reversible y de alta afinidad. La producción de anticuerpos consiste básicamente en:
• Preparación del antígeno,
b)Inyección de este a un animal y
c) Obtención del suero del suero del animal.
Preparación del antígeno: los antígenos deben tener un tamaño mínimo (3000-5000 dalton), aunque moléculas más pequeñas(haptenos) pueden acoplarse a otras mayores (carriers).


Las proteínas han de purificarse antes de inyectarse al animal. Se pueden preparar anticuerpos contra péptidos sintéticos, usándolos comohaptenos.

Es muy común preparar los antígenos mediante el uso de vectores de sobrexpresión en E. coli. Ello permite además la inclusión de “sequence tags” (marcas de secuencia) que facilitan lapurificación.


PASOS PARA UN ENSAYO DE INMUNOHISTOQUIMICA:
INYECCIÓN AL ANIMAL :
Elección del animal : conejos (policlonales), ratones o ratas (monoclonales), hamsters (antígeno limitante),gallinas (antígenos muy conservados), etc.
El antígeno se inyecta normalmente mezclado con adyuvante, el cual:
- Protege el antígeno de ser catabolizado rápidamente
- Produce una estimulación de...