Inmunolocalización de grelina en estómago

Inmunolocalización de grelina en el estómago de la rata Sprague-Dawley

Introducción
La grelina se identificó inicialmente en el estómago de rata como un ligando endógeno del secretagogo de la hormona del crecimiento receptor. Como un potente estimulante del apetito, intracerebroventricular, intravenosa e inyecciones subcutáneas de la grelina han demostrado que aumenta la ingesta dealimentos. Células productoras de grelina se han detectado en las glándulas oxínticas del estómago de la rata. El RNAm de la grelina se encontró que estaba más altamente expresado en el estómago entre los diversos tejidos humanos, de hecho, el estómago es una fuente importante de grelina circulante. También se ha informado de que la grelina se produce predominantemente en el estómago de ratas y sereshumanos. Sin embargo, la inmunolocalización en las diferentes regiones del estómago en ratas no se ha aclarado en detalle. Por otra parte, aún existen algunos informes contradictorios acerca de la inmunolocalización de la grelina en el estómago de las ratas y otras especies.
Morfológicamente, en ratas, el estómago se compone de panza y pars glandular. La panza contiene el fondo de ojo y parte de lacurvatura mayor, que no tiene glándulas gástricas, y la capa de la mucosa está cubierta por epitelio escamoso estratificado, y no se producen las glándulas oxínticas de estómago.
En este estudio, para investigar la distribución de las células productoras de grelina en las diferentes regiones del estómago en ratas, el estómago se divide en cardias, del fondo de ojo, mayor curvatura, curvatura menory el píloro como los seres humanos. Hemos tratado de comparar con los de los seres humanos y otras especies de mamíferos, y se discuten desde la perspectiva funcional.

Materiales y métodos

Animales

Macho Sprague-Dawley (3 - a 6 meses de edad, peso corporal: 350-450 g) adquirido de Clea-Japón, Inc. (Tokio, Japón) fueron utilizados en el experimento de control. Los animales fueron alojadosy manipulados de acuerdo con la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio y de la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Experimentación del Consejo Canadiense de los Animales. Todas las ratas se alojaron bajo iluminación controlada con el estándar F-2 Chow (Nippon Funabashi Farm Co., Ltd., Chiba, Japón) y los gránulos y el agua se suministraron ad libitum.
Todos los protocolospara el cuidado de los animales y los procedimientos experimentales (incluyendo la eutanasia) fueron revisados ​​y aprobados por el Comité de Cuidado de Animales de la Universidad Médica de Tokio y estaban de acuerdo con el Instituto Nacional de Salud directrices.

Preparación de tejidos para inmunohistoquímica

Preparación de tejidos para inmunohistoquímica se realizó como se ha descritoanteriormente. Brevemente, las ratas (n = 10) fueron primero anestesiadas con éter y luego se inyecta por vía intraperitoneal con solución urethrane (etilcarbamato de sodio, 900 mg / kg). Después de que los animales estaban completamente anestesiados, la perfusión se inició con solución salina normal y a partir de entonces con 0,01 M de PBS (pH 7,4) que contiene 4% de paraformaldehído (PFA). Todo elestómago, incluyendo la unión esófago-cardias y parte del píloro, luego se retira y se divide en cinco secciones, cardias, del fondo de ojo, mayor curvatura, curvatura menor y el píloro, y después se sumerge en PFA al 4% a 4 ° C durante la noche. El tejido se fija a continuación, de forma rutinaria incrustado en cera de parafina. Las secciones (5 lm) se cortaron y se colocaron en portaobjetos devidrio recubiertos de gelatina.

Inmunohistoquímica

Procedimientos inmunohistoquímicos se realizaron como se ha descrito previamente (Yi et al., 2004). En pocas palabras, después de enjuagar las muestras de tejido fijadas en PBS 0,01 M (pH 7,4), la actividad de peroxidasa endógena fue inhibida por la incubación de 30 min en metanol que contiene 0,3% (v / v) de peroxidasa de hidrógeno. Después...