Inmunología

PRUEBAS DE DIAGNÓSTICO INMUNOLÓGICO II
1. TURBIDIMETRÍA Y NEFELOMETRÍA
Cuando la luz atraviesa un medio transparente en el que existe una suspensión departículas sólidas, se dispersa en todas direcciones y como consecuencia se observaturbia La turbidez es la propiedad óptica de una muestra que hace que la radiación sea dispersada y absorbida mas que transmitida en línea recta a través de lamuestra. La turbidez es ocasionada por la presencia de materia suspendida en un líquido. Hay dos métodos para medir la turbidez de una muestra, la turbidimetría y la nefelometría. Son dos técnicas complementarias que se utilizan para el análisis cuantitativo de disoluciones coloidales, emulsiones, humos o nieblas. La dispersión no supone la pérdida neta de potencia radiante, solo es afectada ladirección de la propagación, porque la intensidad de la radiación es la misma en cualquier ángulo.
En la turbidimetría se compara la intensidad del rayo de luz que emerge con la del que llega a la disolución. En cambio, en la nefelometría la medida de la intensidad de luz se hace con un ángulo de 90º con respecto a la radiación incidente. El instrumento usado en la nefelometría, el nefelómetro seasemeja al fluorómetro. En cambio en turbidimetría se utiliza el turbidímetro que es un fotómetro de filtro.
Turbidimetría
Es un método en el que se mide la disminución de la potencia de la radiación transmitida debido a la dispersión. Se mide en un espectofotómetro UV/Vis.
Para determinar la concentración del analito mediante este método aplicamos: En donde T es la transmitancia medida,It ,esla intensidad de la fuente de radiación transmitida, Io es la intensidad de la radiación de la fuente transmitida por un blanco.
La relación entre T y la concentración de las partículas dispersas es similar a la
proporcionada por la ley de Beer: - logT = kbC
Siendo C la concentración de las partículas dispersantes expresada como masa por unidad de volumen; b es la longitud del camino óptico y kes una constante que depende de varios factores: tamaño, forma de las partículas dispersantes y la longitud de onda.
Nefelometría
Es un método para medir la intensidad de una radiación dispersa en un ángulo de 90 ºC
con respecto a la fuente. Se mide en un espectrofluorímetro. Para determinar la concentración de analito en este método aplicamos: IS = KSIOC
Donde KS es una constante empírica delsistema, IO es la intensidad de la fuente deradiación incidente. El valor de KS depende de una curva de calibración preparada,
usando una serie de patrones de concentración conocida.

La elección entre turbidimetría y nefelometría viene dada por dos factores:
- Intensidad de la radiación transmitida o dispersada con la intensidad de la radiación
procedente de la fuente. Cuando laconcentración de partículas dispersantes en la disolución es pequeña, IT será muy similar a IO. Por lo que la mejor elección cuando la muestra contiene pocas partículas dispersantes es la nefelometría. La turbidimetría es una buena técnica para cuando las muestras contienen grandes concentraciones de partículas dispersantes.
- Tamaño de las partículas dispersantes. En la nefelometría la intensidad de laradiación
dispersada a 90ºC es mayor si las partículas son bastante pequeñas para que se produzca
una dispersión Rayleigh. Si las partículas son mayores la intensidad de la dispersión disminuirá a 90ºC. En turbidimetría la señal consiste en la disminución relativa de la radiación transmitida, por lo que el tamaño de las partículas dispersantes es menos importante.

2. TECNICAS DE PRECIPITACIONPara la realización de estas técnicas se requiere que tanto el Ac como el Ag se encuentren en un medio fluido en el que sea posible la precipitación del complejo Ag-Ac. Existen diferentes modalidades siendo las principales:

1. Técnica de precipitación propiamente dicha.
2. Técnica de difusión radial de Ouchterlony.
3. Técnica de inmunoelectroforesis.
4. Técnica de difusión radial simple...