inmunologia

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
DEPARTAMENTO DE INMUNOLOGÍA
LABORATORIO DE INMUNOLOGÍA MOLECULAR II

TESIS QUE PARA OBTENER EL GRADO DE:
MAESTRÍA EN CIENCIAS EN INMUNOLOGÍA
“ANÁLISIS DE LA EXPRESIÓN DE CITOCINAS DE
LA LÍNEA CELULAR U937 INCUBADA CON NETS”

PRESENTA:
QBP Georgina del Carmen Filio
Rodríguez.

DIRECTORAS DE TESIS
Dra. IrisCitlali Elvira Estrada García
Dra. Victoria Ramos Kichik

México DF, 2010

El presente trabajo se realizó en el laboratorio de Inmunología Molecular II del
Departamento de Inmunología de la Escuela Nacional de Ciencias Biológicas del
Instituto Politécnico Nacional, bajo la dirección de la Dra. Iris Estrada García y de la
Dra. Victoria Ramos Kichik. Se contó el apoyo económico de lassiguientes
instituciones:
•

Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACyT)

•

Programa Institucional de Formación de Investigadores (PIFI)

•

Proyecto Factor de Transferencia

La autora fue becaria de las siguientes instituciones:
• Consejo Nacional de Ciencia y tecnología (CONACyT), durante el periodo de
enero 2009 – diciembre 2010, con número de registro 228623.
• ProgramaInstitucional de Formación de Investigadores (PIFI), durante el
periodo agosto 2009 - diciembre 2010, con los números de registro 20090792 y
20101286.

ÍNDICE
PÁGINA
ABREVIATURAS

i

RESUMEN

ii

ABSTRACT

iii

1. INTRODUCCIÓN

1

1.1 LOS NEUTRÓFILOS

1

1.2 LAS TRAMPAS EXTRACELULARES LIERADAS POR NEUTRÓFILOS O NETs

2

1.3 LA FORMACIÓN DE LAS NETS

3

1.4 BASESMOLECULARES DE LA FORMACIÓN DE LAS NETS

5

1.4.1 Especies reactivas del oxígeno (ROS)

5

1.4.2 Desanimación de las histonas

5

1.5 UNIÓN A MICROORGANISMOS, ELIMINACION Y FACTORES
ANTIMICROBIANOS DE LAS NETS

6

2. ANTECEDENTES Y PERSPECTIVAS DEL ESTUDIO

8

3. JUSTIFICACIÓN

9

4. HIPÓTESIS 10

10

5. OBJETIVOS

10

5.1 OBJETIVO GENERAL

10

5.2 OBJETIVOSPARTICULARES

10

6. METODOLOGÍA CIENTÍFICA
6.1 Cultivo de M. tuberculosis cepa 37Rv; M. Smegmatis; Listeria
monocytogeneses, Escherichia coli y S. aureus
6.2 Purificación de los neutrófilos humanos
6.3 Diferenciación de macrófagos derivados de monocitos de la línea celular
U937
6.4 Infección de macrófagos con NETs, M. tbc cepa H37Rv y DNasa
6.5 Análisis de inducción de citocinas por CBA(Cytometric Bead Array)
6.6 Cuenta viable de bacterias atrapadas en las NETs
7. RESULTADOS
7.1 Análisis del efecto de las NETs atrapando a M. tbc H37Rv, sobre la
concentración de citocinas liberadas por los macrófagos de la línea celular

10
10
11
11
11 11

12
13 13
14 14

14

U937
7.2 Todas las bacterias de la especie M. tbc H37Rv son atrapadas por las
NETs, pero su crecimientose ve afectado

21

8. DISCUSIÓN

25 25

9. CONCLUSIONES

28 28

10. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

29 29

ÍNDICE DE FIGURAS

PÁGINA
Figura 1. Fotografías al microscopio electrónico de barrido mostrando bacilos de
Shigella atrapados por las NETs……………………………………………………………….

3

Figura 2. Mecanismos de formación de las NETs…………………………………... ……...

4

Figura 3. Concentraciones delas citocinas liberadas por los macrófagos de la línea
celular U937 con los diferentes estímulos incubados durante 24h. DONADOR A……….

15

Figura 4. Concentraciones de las citocinas liberadas por los macrófagos de la línea
celular U937 con los diferentes estímulos incubados durante 24h. DONADOR B……….

16

Figura 5. Concentraciones de las citocinas liberadas por los macrófagos de lalínea
celular U937 con los diferentes estímulos incubados durante 24h. DONADOR C………

17

Figura 6. Concentraciones de las citocinas liberadas por los macrófagos de la línea
celular U937 con los diferentes estímulos incubados durante 24h. DONADOR D…........

18

Figura 7. Concentraciones de las citocinas liberadas por los macrófagos de la línea
celular U937 con los diferentes estímulos...