Inmunologia

PRÁCTICA #15 “TÉCNICA ELISA”
APLICAR TÉCNICA INMUNOHEMATOLÓGICAS

I.-INTRODUCCIÓN
Esta prueba enzimática se basa en el uso de antígenos o anticuerpos marcados con una enzima, de forma quelos conjugados resultantes tengan actividad tanto inmunológica como enzimática.
Al estar uno de los componentes (antígeno o anticuerpo) marcado con una enzima e insolubilizado sobre un soporte(inmunoabsorbente), la reacción antígeno anticuerpo quedará inmovilizada y, por lo tanto, será fácilmente revelada mediante la adción de un substracto específico que al actuar, la enzima producirá un colorobservable a simple vista o acuantificable mediante el uso de un espectrofotómetro o un colorímetro.

Existen varios tipos de ELISA:
-Anticuerpos marcados
*ELISA DIRECTO
*ELISA INDIRECTO
*ELISASANDWICH
-Antígeno marcado
*ELISA COMPETITIVO

II.-OBJETIVO
Realizar la técnica ELISA adecuadamente, y proporcionar una correcta interpretación de resultados

III.-MATERIALES
-Kit ELISA
-Deacuerdo al Kit se solicitarán los materiales necesarios

IV.-MATERIAL BIOLÓGICO
-Suero problema

V.-PROCEDIMIENTO
Se seguirán instrucciones de acuerdo al instructivo del Kit.

ELISA directo:Consta de las siguientes etapas:
-Fijación del soporte insoluble (“tapizado”) de antígenos específicos lavado para eliminar los antígenos fijados deficientemente o no fijados.
-Adición deanticuerpos (“conjugados”) con una enzima; si los anticuerpos reaccionan con los antígenos, el complejos quedará solubilizado. Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.
-Adiciónde un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se puede para la reacción si se desea.
-Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.

ELISA indirecto.
Constade las siguientes etapas
-Fijación al soporte insoluble de antígenos específicos para los anticuerpos objeto de estudio. Lavados para eliminar los antígenos fijados deficientemente o no fijados....