Inmunologia

INFORME DE PRÁCTICAS DE INMUNOLOGÍA





PRÁCTICA 1: “E.L.I.S.A.-Inmunodoting”

INTRODUCCIÓN:

Se trata de un enzimoinmunoensayo donde se combinan una enzima con el Ag o con el Ac. La enzima metabolizará un sustrato y dará lugar a un color. Se pueden usar distintas enzimas tales como fosfatasa, peroxidasa, galactosidasa.
En este método se usa una membrana de nitrocelulosa sobre laque se fija el
antígeno. Se añade sobre la membrana el Ac que reconoce específicamente
ese antígeno y que lleva unida la enzima. Al añadir el sustrato correspondiente se generará un producto.

OBJETIVO:

Detectar la presencia/ausencia de IgGs (Ag) en varias muestras problema de suero mediante un ensayo de inmunodoting.


ASPECTOS A DESTACAR:


Se colocan 5 microlitros de cada muestra( +,-, 1, 2, 3) en su punto correspondiente y se espera a que se seque. Posteriormente, se cubre con solución de bloqueo (albúmina en nuestro caso) durante 10 minutos. A continuación se lava con agua destilada y se sacude. Tras sacudir la placa, se añaden a cada pocillo 40 microlitros de Ac conjugado con fosfatasa alcalina, y se incuba a temperatura ambiente durante 10 minutos. A continuación,se lava con agua destilada y se añade el cromógeno en la zona donde se depositaron las muestras. Cuando se aprecie la señal del control positivo, se para la reacción lavando con agua destilada.



RESULTADOS:

En este caso, el resultado positivo fue en la muestra + así como en la muestra 2.

PRÁCTICA 2: “INMUNODIFUSIÓN RADIAL (MANCINI)

INTRODUCCIÓN:

Se trata de unainmunoprecipitación, que es una interacción reversible de un Ag soluble con su anticuerpo en proporciones próximas al punto de equivalencia, originado un precipitado más o menos insoluble.
El resultado se mide por turbidimetría o a simple vista, según el soporte utilizado.
Se usa un gel que lleva incorporado el Ac a concentración constante. Depositamos el Ag en el pocillo donde difunde radialmente en todasdirecciones. Cuando alcance la zona de equivalencia precipitará y se verá un halo.

OBJETIVO:

Determinar cuantitativamente la cantidad de proteína antígeno presente en una solución. Se basa en aplicar el antígeno sobre unos pocillos practicados en geles de agarosa que contienen una concentración conocida de anticuerpo específico. Al difundir la solución del antígeno problema por suinterior, llegará un momento en el que se alcanza la zona de equilibrio
produciéndose una anillo estable y observable a simple vista.

ASPECTOS A DESTACAR:

Con ayuda de una punta de pipeta se hacen en la placa pocillos para cada muestra patrón ( 1: 0’1 mg/ml, 2: 0’2 mg/ml, 3: 0’4 mg/ml, 4: 0’6 mg/ml, 5: 1/100, 6: 1/200) siendo diluciones las dos últimas. Se colocan en la placa teniendo encuenta cuál es cada uno para la posterior curva de calibrado. En cada pocillo se colocan 10 microlitros de las muestras y problemas, según corresponda en cada caso, posteriormente se toma la cámara húmeda y se corta papel de filtro del tamaño del fondo, se humedece el papel y se coloca en el fondo. Se introduce la placa en la cámara húmeda y se deja 24 horas a temperatura ambiente (en nuestro caso,como teníamos que esperar todo el fin de semana hasta el lunes, se dejó a baja temperatura). Posteriormente, se añade solución de lavado hasta cubrir el gel durante 15 min, se agita y se
cambia la solución tres o cuatro veces para eliminar las proteínas no precipitadas. Finalmente se seca el gel tomando un círculo de papel de filtro del mismo tamaño del gel, colocándolo sobre éste y poniendoencima abundante papel seco hasta que el gel se reduzca a una película.


RESULTADOS:

|Concentración |Diámetro*Diámetro |
|0’1 mg/ml |0’16 |
|0’2 mg/ml |0’49 |
|0’4 mg/ml |0’64 |
|0’6 mg/ml |1...