Inmunomarcaje

Cuando utilizamos un anticuerpo para localizar un antígeno hablamos de Inmunomarcaje. El Inmunomarcaje se emplea para hacer diagnóstico, pero también para identificar tipos celulares, localizar orgánulos dentro de las células, etc. Cuando trabajamos con tejidos hablamos de Inmunohistoquímica (IHQ) y cuando trabajamos con células individualizadas de Inmunocitoquímica.

Por tanto, consiste enla utilización de anticuerpos marcados para revelar, mediante microscopía, la presencia “in situ” de antígenos en tejidos de estudio. No solo son componentes fundamentales en el sistema inmune de vertebrados sino que son reactivos biológicos para el laboratorio clínico y el de investigación.

TERMINOLOGÍA
• ANTÍGENO: cualquier sustancia extraña que, introducida en el interior
de un organismo,provoca una respuesta inmunitaria estimulando la producción de Ac.

• EPÍTOPO o determinante antigénico: es la región del antígeno que

estimula la producción de, y es reconocida por, un Ac. Un mismo Ag puede tener distintos epítopos. Los Ac son específicos de un epítopo y no de la molécula de Ag entera.

• ESPECIFICIDAD: capacidad de un Ac de reconocer su Ag y no otros.
Depende de laregión Fab del Ac.
Ag.

• AFINIDAD: fuerza o intensidad de unión de un Ac y su correspondiente • REACCIÓN CRUZADA: cuando un Ac frente a un determinado Ag se

une con otro Ag diferente, pero estructuralmente relacionado, se habla de reacción cruzada. se puede inmunodetectar. Depende de varios factores como, el antisuero primario (título, afinidad), antisuero secundario, método de visualización etc.• SENSIBILIDAD: se define como la mínima cantidad de antígeno que

• Los anticuerpos o inmunoglobulinas (se abrevian Ig) son glucoproteínas plasmáticas, de alto peso molecular, presentes en el suero y producidas por los linfocitos B en respuesta a una estimulación antigénica.

Esquema de linfocito B y su transformación en célula plasmática

•

Están constituidos por 4 cadenaspolipeptídicas (dos pesadas y dos ligeras) unidas por puentes disulfuro. – A su vez cada cadena posee una región variable, cuya secuencia de aminoácidos es característica de cada Ac y es la región del Ac que reconoce y se une al epítopo correspondiente, y otra región constante, con la misma secuencia para cada clase de Ig de una especie. – Estas cadenas se unen formando una Y. – Mediante digestión conpapaína se obtienen dos fragmentos Fab (antigen binding), que contienen las regiones variables y por tanto responsable de la especificidad y un fragmento Fc ( cristalizable), con importantes funciones biológicas.

REGIÓN VARIABLE

REGIÓN CONSTANTE

Localización de los sitios de unión con el antígeno

Cada molécula de inmunoglobulina tiene dos sitios de unión con el antígeno.

• Losdominios variables (VL y VH) tienen como función la unión al antígeno y por tanto, son los responsables de la especificidad de la inmunoglobulina, mientras que los dominios constantes permiten la diferenciación de los cinco isotipos de cadenas pesadas (m,g,e,a,d) que formarán las inmunoglobulinas (IgM, IgG, IgE, IgA e IgD) y de los dos tipos de cadenas ligeras: capa (K) y landa (l). Así como, son losresponsables de las funciones efectoras de las inmunoglobulinas (fijación del complemento, receptores celulares, etc.)

ANTISUEROS POLICLONALES
• Consisten en una mezcla de diferentes Ig frente a distintos epítopos de un mismo antígeno y se obtienen por exposición de un vertebrado superior a dicho Ag. El conejo es el más utilizado, pero también, cabra, oveja, cerdo, caballo, rata, e inclusogallina. Para la inmunización se inyecta al animal el Ag procedente de una especie diferente. Los linfocitos reaccionan y generan una batería de Ig dirigidas frente a distintos epítopos de ese Ag. Se obtiene un conjunto de Ig que provienen de diferentes clones de linfocitos B y por tanto, con diferente especificidad. El antisuero resultante contendrá Ig dirigidas frente a distintas regiones del...