inmunomicroscopia

Inmunomicroscopía: Una herramienta fiable para el análisis de procesos celulares.
Microscopía electrónica es una herramienta indispensable para investigar las intrincadas estructuras de la célula y orgánulos, y también para estudiar los procesos biológicos celulares implicados en la respuestas a los cambios en el microambiente. Sin embargo, varios eventos celulares pueden estar perder si losestudios ultraestructurales convencionales no se complementan con detalles relativos a la localización subcelular de una amplia gama de proteínas específicas que pueden convertirse reorganizado como parte de sus propios procesos dinámicos. Por lo tanto, la microscopía inmunoelectrónica surge como una técnica que une la brecha de información entre la bioquímica, molecular biología, yultraestructurales estudios, al establecer funciones macromoleculares dentro de un celular contexto.
El presente capítulo tiene por objeto describir el alcance y los protocolos de las principales métodos inmune que se han utilizado con éxito en nuestro centro de investigación para la examen y análisis de proteínas de la superficie celular intracelulares y en células de mamífero.
Por otra parte, a nivel ultraestructural, se demuestra el papel de la inmuno-etiquetado el estudio de los procesos biológicos inducida por diferentes estímulos del entorno.

Consideraciones generales sobre inmunomicroscopía
Microscopía inmunoelectrónica es uno de los mejores métodos para la detección y localización de proteínas en células y tejidos. Este procedimiento se puede utilizar en prácticamente todos los unicelularesy organismo multicelular, ya menudo proporciona una visión inesperados en la estructura-función asociaciones. El uso de anticuerpos primarios conjugados con partículas de oro highresolution permite la detección y localización de una multiplicidad de antígenos, tanto en y dentro de la las células. Sin embargo, la aplicación exitosa de inmunomicroscopía depende de la preservación de laantigenicidad de proteínas, la capacidad de los anticuerpos para infiltrarse en todo la célula, y, finalmente, la especificidad de reconocimiento entre los anticuerpos de antígeno primarios. Además, se requiere un adecuado manejo de muestras biológicas, que implica la fijación, una selección apropiada de una resina de incrustación y de la fácil disponibilidad de la específica anticuerpos para las moléculascuya localización ultraestructural necesita ser determinado .
Desde 1971, cuando W.P. Faulk y G. M. Taylor publicó " Un método para la immunocolloid microscopio electrónico " , oro coloidal se ha convertido en un marcador utilizado muy ampliamente en microscopía . Como el conocimiento de la ubicación y distribución de las proteínas en el nivel subcelular juega un papel fundamental en la biología dela célula , esta herramienta se ha aplicado para detectar una amplia gama de celular y componentes extracelulares mediante hibridación in situ, inmuno , lectina - oro, y etiquetado enzima - oro . Además de su uso a nivel de microscopía de luz , oro coloidal permanece la etiqueta de elección en microscopía electrónica de transmisión ( TEM ) para el estudio de secciones delgadas , réplicascongelación de grabado , y la superficie , así como en microscopía electrónica de barrido .
Aunque la microscopía electrónica convencional no proporciona información sobre moléculas específicas , inmuno- etiquetado puede ayudar a conectar una estructura visible con una específica in situ localización y distribución de las moléculas con una resolución alta . De esta manera , el uso de la partículas de orocoloidal , sin duda, representa un acontecimiento importante en la mejora de el método de inmunoquímica .
Muchos protocolos se han desarrollado desde la introducción del oro coloidal inmunocitoquímica , con las dos técnicas más utilizadas , sin embargo, siendo en realidad basado en la microscopía electrónica de transmisión y que consiste en cualquiera immunolabeling después incrustación en...