Inmunoprecipitación

PRÁCTICA NO. 1
PRUEBAS DE INMUNOPRECIPITACIÓN



PRÁCTICA NO. 1
PRUEBAS DE INMUNOPRECIPITACIÓN.
OBJETIVOS:

* Manifestar la formación antígeno-anticuerpo mediante las pruebas de precipitación y aglutinación.
* Familiarizarse con la preparación de láminas y placas con agar para inmunodifusión

INTRODUCCIÓN

INMUNOPRECIPITACIÓN.
Las pruebas de inmunoprecipitación sonprocedimientos serológicos que demuestran la existencia de anticuerpos capaces de provocar la precipitación de sus correspondientes antígenos cuando ambos reactivos se encuentran en solución.
Pueden ser realizadas en medios líquidos como en medios semi-sólidos (geles). En los primeros, la interacción de antígeno y anticuerpo resulta a menudo perturbada por la formación de corrientes y otros disturbiosdebido a cambios de temperatura y/o de pH. Los geles, por el contrario, forman mallas que estabilizan la solución, facilitando el revelado de la reacción antígeno-anticuerpo.
Para que tenga lugar la inmunoprecipitación, es necesario que interactúen en solución anticuerpos que sean por lo menos bivalentes, con antígenos multivalentes; solo así, es posible que se configuren los agregados molecularesque, al entrelazarse, adquirirán la propiedad de precipitar. Los anticuerpos más frecuentemente involucrados en el fenómeno de inmunoprecipitación pertenecen a la clase IgG de las inmunoglobulinas, las IgM también pueden participar.
La interacción de antígeno y anticuerpo puede ser facilitada dejándolos difundir espontáneamente en el seno de un gel (prueba de inmunodifusión) o acelerando suencuentro utilizando un campo eléctrico (electroinmunodifusión).
También se pueden separar las fracciones moleculares de un muestra mediante electroforésis y luego realizar una inmunodifusión (inmunoelectroforésis).
Las pruebas de inmunoprecipitación se pueden utilizar para identificar y cuantificar inmunoglobulinas u otras proteínas, identificación de bacterias, etc. En el estudio de estructurasde enzimas, hormonas y otras sustancias. Así mismo, los métodos de inmunodifusión nos permiten identificar compuestos antigénicos que pueden estar jugando un papel importante en la patogenicidad de una enfermedad.
Para las pruebas de inmunoprecipitación, es necesario contar con antígenos hidrosolubles.

* “INMUNODIFUSIÓN EN GELES”
* INMUNODIFUSIÓN DOBLE (PRUEBA DE OUCHTERLONY)La inmunodifusión doble se caracteriza porque el antígeno y el anticuerpo (colocados en pozos diferentes en un medio semisólido) difunden espontáneamente en el gel; en el sitio donde se encuentran en zona de equivalencia forman una línea de precipitación visible. La interacción de ambos reactantes es consecuencia de la agitación térmica de las moléculas e iones y la velocidad será proporcional ala diferencia de concentraciones que existen entre el pozo y el gel circulante, la cual disminuirá progresivamente a medida que el reactivo se vaya diluyendo al difundir en la agarosa. Otros factores como temperatura de reacción, tamaño molecular de los reactantes y las carácteristicas físico-químicas del gel influencian la difusión de ambos reactantes.
En general, la técnica dedoble-inmunodifusión es sencilla y sensible (0,2 mg/ml) y usualmente nos permite observar los tres patrones básicos de precipitación:
1. REACCIÓN DE IDENTIDAD
Cuando los antígenos son idénticos y el antisuero reacciona con ambos, se originan dos líneas de precipitación que se unen formando un arco simple.
2. REACCIÓN DE SEMI-IDENTIDAD
Cuando hay antígenos serológicamente diferentes, pero quecomparten determinantes antigénicos y existen anticuerpos para cada uno de los determinantes antigénicos, se producirá una reacción cruzada y se observarán dos líneas de precipitación que se interceptan con una pequeña prolongación hacia uno de los orificios de los antígenos.

3. REACCIÓN DE NO IDENTIDAD
En este caso, los antígenos son diferenes entre sí y el antisuero posee anticuerpos contra...