Inmunoprecipitacion

Inmunoprecipitacion
Permite el aislamiento del antígeno de interés en una célula o tejido determinado se pueden determinar:
Presencia y cantidad
Peso molecular relativo de una cadena polipeptídicaSíntesis y degradación
Interacción con proteínas
Ácidos nucleicos u otros ligandos.
Un extracto de de una rotura de células o tejidos se mezcla con un anticuerpo contra el antígeno a fin deformar un complejo antígeno-anticuerpo que se precipitara.
Por la necesidad de formar un complejo antígeno-anticuerpo la prueba puede requerir horas, incluso dias
La base de esta técnica consiste enconcentrar al máximo la proteína de interés para posteriormente desarrollar los inmunocomplejos, de tal forma que el número de bandas inespecíficas obtenidas por esta técnica disminuye considerablementecuatro pasos (Figura 17.17):
1. Marcaje del antígeno (opcional)
2. Lisis de las células para liberar el Ag
3. Formación del complejo Ag-Ac
4. Purificación de losinmunocomplejos
1. En el tejido homogeneizado vamos a tener el antígeno de interés mezclado con otros muchos. Para poder concentrarlo, el antígeno se marca incubándolo con un precursor radiactivo aunquemuchos antígenos se pueden detectar por medios que no requieren marcaje directo. primero se añade el anticuerpo primario a una concentración saturante, para que todo el antígeno presente en el tejido seuna al anticuerpo (fase de inmunoabsorción).
2. El antígeno se extrae de las células mediante lisis.
3. los anticuerpos se añaden al lisado y se forman los inmunocomplejos Ag-Ac
4. Losinmunocomplejos se analizan generalmente por electroforesis en gel pero también pueden ser usados en diferentes técnicas:


*Estudios enzimáticos
*Unión a ligandos
*inmunizaciones
*Inmunoblotting
*Apoyosolido (cuenta sintetica)
*Centrifugacion
*CUENTAS MAGNETICAS, los inmunoprecipitados se colectan colocando un iman cotra el lado opuesto del tubo
Permite detelimitar:
*si una celula sintetiza...