Inmunoquimica

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

INSTITUTO DE BIOTECNOLOGÍA

Maestría en Ciencias Bioquímicas
Curso de Métodos Fisicoquímicos en Biotecnología

Inmunoquímica

Presenta:
IBQ. Rocío Vanessa Calderón Pascacio

Coordinador del curso Dr. Roberto P. Stock Silberman

Cuernavaca, Morelos, Junio 2007

Contenido
Introducción ……………………………………………..……………………………...

4

Historia de la inmunología……………………………………………………………...

4

Anticuerpos ……………………………………………………………………………..

10

Antígenos ……………………………………………………………………………….

13

Interacción antígeno-anticuerpo ………………………………………………………...

15

Anticuerpos monoclonales y policlonales ………………………………………………

17

Técnicas inmunoquímicas ……………………………………………………………...

19

Técnicas de precipitación ……………………………………………………….

21

Reacción de precipitación clásica ……………………………………….

21

Técnicade precipitación ……………………………………………….

22

Técnica de difusión radial doble de Ouchterlony ……………………….

23

Técnica de inmunoelectroforésis ………………………………………..

23

Incremento de precipitación por inmunoelectroforesis con
contracorriente …………………………………………………..

23

Técnica de difusión radial simple de Manzini (SRID) ………………….

24

Técnicas de aglutinación ………………………………………………………..

25

Aglutinación departículas recubiertas por antígeno ……………………

25

Hemoaglutinación directa ……………………………………………….

26

Hemoaglutinación indirecta ……………………………………………..

27

Técnicas de inmunofluorescencia ………………………………………………

27

Citometría de flujo ………………………………………………………

29

Técnica de radioinmunoensayo …………………………………………………

32

Técnica de enzimoinmunoensayo (ELISA) …………………………………….

34

Nefelometría…………………………………………………………………….

36

Selección de células unidas a un anticuerpo ……………………………………

39

Purificación de antígenos y anticuerpos por cromatografía de afinidad ………..

39

Inmunoprecipitación e inmunoblotting …………………………………………

40

Western blot, Dot blot y Slot blot ……………………………………….

41

Detección específica de proteínas en filtros …………………….

43

Bloqueo de la membrana ………………………………………..

43

2

Tinción de proteínas en el filtro …………………………………

45Colorantes ……………………………………………………….

45

Tinción mediante biotina-estreptavidina ………………..

45

Tinción mediante oro coloidal ……………………..........

45

Análisis de interacciones moleculares (BIAcore) ………………………………

46

Aplicaciones principales ………………………………………………...

47

Otras técnicas basadas en la unión antígeno-anticuerpo ………………………..

47

Técnicas de biología molecular útiles en inmunología …………………………

48Southern Blot ……………………………………………………………

48

Hibridación fluorescente in situ (FISH: Fluorescent In Situ

49

Hybridization) …………………………………………………………...
FISH de Metafase …………………………………………….....

50

FISH de Interfase ………………………………………………..

50

PCR in situ ………………………………………………………………

51

Mecanismo de la reacción ………………………………………

52

Bibliografía ……………………………………………..………………………………

53

3

Introducción
Paraentender las técnicas inmunoquímicas, primero debemos comprender conceptos
básicos sobre inmunología.
Los animales superiores son atacados por microorganismos y partículas extrañas. Pero
poseen sistemas defensivos frente a tales patógenos; dichos mecanismos tienden a
distinguir lo propio de lo extraño
La inmunidad es un conjunto de mecanismos de defensa de los animales frente a agentes
externosextraños. Se adquiere al nacer, y va madurando y consolidándose durante los
primeros años de vida.
La inmunología es la ciencia biológica que estudia todos los mecanismos fisiológicos de
defensa de la integridad biológica del organismo. Dichos mecanismos consisten
esencialmente en la identificación de lo extraño y su destrucción. La inmunología también
estudia los factores inespecíficos que coadyuvan alos anteriores en sus efectos finales.
La respuesta inmune es la actuación integrada de un gran número de mecanismos
heterogéneos de defensa contra sustancias y agentes extraños. En general, a las sustancias
extrañas se las denomina como antígenos, y son ellos los que desencadenan en el
organismo una serie de eventos celulares que...