Inserto proteinas por biuret

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BIOQTJANT@

1.10307

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Técnica de las determinaciones La mejor manera de realizar las mediciones es en cubetas de uso único de plástico (espesor de capa 1 cm) a 546 nm. La compensación del cero del fotómetro puede realizarse frente aire o frente a agua. Esquema de pipeteo Intervalo de medida 1 (l-10 g/l) Solución de la muestra/ solución patrón Agua bidestilada Solución reactiva debiuret 2,0 ml Muestra o patrón Valor en blanco

Proteínas
(según el método del biuret)

MERCK
AI%. 1.10307.0500 BIOQUANT@ Proteínas

0,5 ml 0,5 mi 2,0 ml

(según el método del biuret) Solución reactiva para aprox. 250 determinaciones Intervalos de medida

Mezclar bien e incubar durante 30 minutos a temperatura ambiente. Seguidamente medir las extinciones (absorciones) a 546 tun. Esquemade pipeteo Intervalo de medida 2 (05-5 g/l) Solución de la muestra/ solución patrón Agua bidestilada Solución reactiva de biuret 2.0 ml Muestra o patrón Valor en blanco

Intervalo de medida 1: I-10 g/l Intervalo de medida 2: 0,5- 5 gll Método de determinación Las proteínas, en una solución de sulfato de cobre alcalina que contenga tartratos (reactivo del biuret) forman un complejo de colorvioleta azulado. La extinción (absorción) de las soluciones de medición se miden normalmente a 546 nm. Se determina el contenido de proteínas en las muestras por calibración mediante soluciones patrón de proteínas.1-3 Contenido del envase, almacenamiento y estabilidad Un frasco contiene 500 ml de solución de biuret y es suficiente para aprox. 250 determinaciones, La solución se puede utilizar comomínimo durante 12 meses a temperatura ambiente. En caso de almacenamiento en el refrigerador entre + 2 y + 8 “C se puede utilizar como mínimo durante 2 años. Preparación de las muestras Las soluciones de las muestras deberían ser límpidas y no mostrar coloración propia. Las soluciones de las muestras turbias se centrifugan o se filtran. En el caso de soluciones coloreadas de las muestras y en el casode muestras con pequeño contenido de proteínas (< 0,5 g/l) se recomienda precipitar las proteínas por adición de solución de ácido tricloracético a partir de un volumen definido y seguidamente recogerlo otra vez en un volumen (menor) de agua bidestilada. Preparación de la solución de ácido tricloracético (solución de TCA): Se disuelven cuidadosamente 5 g de ácido tricloracético (art. 1.00807) en10 ml de agua bidestilada (solución al 50 % (p Iv)). Técnica: Para la precipitación se añade por 1 ml de solución de la muestra 0,2 ml de solución de TCA al 50 % (piv), se mezcla y se centrifuga. El sobrenadante se desecha y el precipitado se disuelve con un volumen definido (eventualmente algo menor) de agua bidestilada. Esta solución de la muestra se utiliza para el test. Cantidad estimada deproteína en la muestra (gil) < 0.5 0,5- 5,0 í,0-10,o > 10.0 precipitación con TCA intervalo de medida 2 intervalo de medida 1 dilución

1,0 ml 1,O ml 2,0 ml

Mezclar bien e incubar durante 30 minutos a temperatura ambiente. Seguidamente medir las extinciones (absorciones) a 546 nm. Evaluación Se calculan las diferencias de extinción AE = Epatrón- E,do, enblanco Para establecer la curva de calioresp. AE = Emuestr,- Evaloren~~mco.. brado se aplican los valores AE frente a las correspondientes concentraciones patrón de proteínas. La determinación del contenido de proteínas de muestras desconocidas tiene lugar o bien gráficamente en base a la curva de calibrado determinada o por cálculo mediante la pendiente determinada de las rectas. (Para algunas proteínas importantes se agrupan laspendientes en una tabla [((factores del biuretr)14). Nota: Si se diluyó la muestra antes de la medición, el resultado debe multiplicarse todavía por el correspondiente factor de dilución. Interferencias Aunque sólo pocas sustancias interfieren en el método del biuret, algunas de tales sustancias encuentran aplicación frecuente en la química de proteínas, como p.ej. sulfato amónico, tris, glicerina y...