Inserto

Glicemia
enzimática
Método enzimático para la determinación de glucosa en suero o plasma SIGNIFICACION CLINICA La patología más común relacionada con el metabolismo de los hidratos de carbono es la diabetes mellitus. El diagnóstico precoz y el control de los pacientes diabéticos, tienen por objeto evitar la cetoacidosis y las complicaciones de los síntomas resultantes de la hiperglicemia,mediante el tratamiento adecuado. Dado que existen múltiples factores causales de hiper o hipoglicemia, debe considerarse en cada caso la condición fisiológica y/o la patología presente en el paciente en cuestión. FUNDAMENTOS DEL METODO El esquema de reacción es el siguiente: GOD glucosa + O2 + H2O > ácido glucónico + H2O2 POD 2 H2O2 + 4-AF + fenol > quinona coloreada + 4 H2O REACTIVOS PROVISTOS A.Reactivo A: solución de 4-aminofenazona 25 mmol/l en Buffer Tris 0,92 mol/l. B. Reactivo B: solución de fenol 55 mmol/l. C. Reactivo C: solución de glucosa oxidasa (1000 U/ml) y peroxidasa (120 U/ml). S. Standard: solución de glucosa 1 g/l. Concentraciones finales GOD .................................................................... ≥ 3000 U/l POD..................................................................... ≥ 400 U/l 4-AF ...................................................................... 1,25 mM Fenol ..................................................................... 2,75 mM pH .......................................................................... 7,4 ± 0,1 REACTIVOS NO PROVISTOS Agua destilada. Ver LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO. INSTRUCCIONES PARA SU USO Standard:listo para usar. Reactivo A: listo para usar. Reactivo B: listo para usar. Ver PRECAUCIONES. Reactivo C: homogeneizar por inversión antes de usar, evitando la formación de espuma. Reactivo de Trabajo: de acuerdo al volumen de trabajo, colocar en una probeta 500 partes de agua destilada, 50 partes de Reactivo A, 50 partes de Reactivo B y llevar a 1000 partes con agua destilada. Agregar 3 partes deReactivo C previamente homogeneizadas. Mezclar por inversión, sin agitar. Rotular y fechar. Pueden prepararse distintas cantidades respetando las proporciones antedichas. Es importante además, respetar el orden de agregado de los reactivos y asegurar una perfecta homogeneización de los mismos, a fin de que el Reactivo B no deteriore el Reactivo de Trabajo. PRECAUCIONES Los reactivos son para usodiagnóstico "in vitro". El Reactivo B (fenol) es tóxico e irritante. R36/38: irrita los ojos y la piel. R25: tóxico por ingestión. S24/25: evítese el contacto con los ojos y la piel. S37/39: usar guantes adecuados y protección para los ojos/la cara. Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales de trabajo en el laboratorio de análisis clínicos. Todos los reactivos y las muestras debendescartarse de acuerdo a la normativa local vigente. ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO Reactivos Provistos: son estables en refrigerador (2-10oC) hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja. No mantener a temperaturas elevadas durante lapsos prolongados. Reactivo de Trabajo: en refrigerador (2-10oC) y en frasco color caramelo es estable un mes a partir de la fecha de supreparación. INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS REACTIVOS Durante el uso, el Reactivo de Trabajo puede desarrollar un ligero color rosado que no afecta su funcionamiento siempre que se procese un Blanco con cada lote de determinaciones y un Standard periódicamente. Desechar cuando las lecturas del Blanco sean superiores a 0,160 D.O. o las lecturas del Standard sean anormalmente bajas. MUESTRA Sueroo plasma a) Recolección: se debe obtener suero o plasma de la manera usual. Cuando no es posible extraer sangre venosa o en casos de extrema urgencia, la determinación se puede realizar en sangre capilar. b) Aditivos: en caso de que la muestra a emplear sea plasma, se recomienda el uso de Anticoagulante G de Wiener lab. para su obtención (el mismo contiene fluoruro como conservador). c)...