INSTRUCCIONES DE TRABAJO

EXUDADO VAGINAL

1. Objetivos
Aislar e identificar microorganismos implicados en infecciones genitales.

2. Campo de aplicación
Departamento de Microbiología

3. Definiciones
No incluye

4. Responsable de ejecución
Analistas del departamento de Microbiología

5. Descripción de actividades
5.1 Principio e interpretación clínica
Las infecciones genitales representan una de las causas que con mayorfrecuencia son origen de consulta ginecológica. El diagnóstico se logra valiéndose de cultivo microbiológicos y de técnicas que ponen de manifiesto la presencia de microorganismos.

5.2 Método
Cultivo en medios selectivos y diferenciales

5.3 Lista de inspección
Verificar temperatura de Estufas (35 - 37°C) Verificar temperatura de Refrigerador (2 - 8°C) Verificar temperatura del Baño María (44 -46°C)

5.4 Reactivos
Agar Thayer-Martin (medio comercial)
Agar sangre humana con Isovitalex y Ac.nalidíxico
Agar sangre de carnero (medio comercial)
Agar Mac Conkey (medio comercial)
Agar sal y manitol
Agar Nickerson o Biggy
Agar tripticasa soya
Caldo trpticasa
Caldo urea
Caldo érginina
Solución salina al 0.85%

5.5 Equipos y Aparatos
Microscopio Óptico
Microscopio estereoscopico. VortexIncubadoras
VITEK2 compact BioMerieux


5.6 Muestreo y muestra
Se realiza la toma de muestra de la paciente una vez colocada en posición ginecológica, empleando un espejo vaginal desechable sin lubricante. Obteniéndose la secreción de los sacos laterales y posteriores de la vagina por medio de hisopos de algodón estériles.
Con un primer hisopo se remueve la secreción y se inocula en Agar sangrehumana, en Agar Thayer-Martin (este medio se inocula rotando el hisopo sobre la superficie del agar en forma de Z), en Agar Biggy y caldo de soya tripticasa.
- Un segundo hisopo con secreción se coloca en un tubo de ensayo con Solución salina al 0.85% (2 mL) a temperatura ambiente, para estudio de Trichomonas vaginalis.
- Con 2 hisopos más se inoculan los caldos arginina y urea (un hisopo para cadacaldo respectivamente).
- Para el diagnóstico de vaginosis bacteriana se procede a medir el pH de la secreción obtenida por medio de tira reactiva (Merck) signo positivo igual o superior a 5.5, lo cual nos indica hacer preparaciones de la secreción en un portaobjetos para la tinción de Gram, ésta laminilla se tiñe siempre y cuando no se aislen microorganismos patógenos en el estudio permitiendo deésta manera ratificar la observación de la ausencia, disminución o presencia de la flora lactobacilar normal.
- Con un hisopo de dacron estéril es usado para hacer un raspado del cervix, para inocular el medio de transporte para la detección de Chiamydia trachomatis.
- Los medios se remiten al laboratorio.

Interferencia: Se descarta del estudio a toda paciente que esté en ciclo menstrual. Así comoa toda aquella paciente que manifestó antecedentes de administración de antimicrobianos en el curso de 7 días antes.

5.7 Proceso de análisis
Una vez remitidos los medios al laboratorio se procede a lo siguiente:
- A partir de la Solución salina al 0.85%, se coloca en una laminilla una gota de la mezcla obtenida, para el estudio en fresco e identificar en el microscopio a un aumento de 40X lapresencia de Trichomonas vaginalis (caracterizándose por su movilidad típica).
- El agar sangre humana se siembra por estría cruzada, se incuba a 35°C por 24-72 horas en CO2. Se identifican colonias pequeñas, blanco grisáceas, con beta hemolísis después de 72 horas de incubación a 35°C en CO2, sugestivas de Gardnerella vaginalis.
- El agar Thayer-Martin se estría sobre la Z en forma contraríacruzando la primera estría, se incuba la placa a 35°C por 48 horas en CO2, revisando la placa cada 24 horas, observar colonias sospechosas de Neisseria gonorrhoeae.
- Para los caldos arginina y urea, se dejan los hisopos en éstos por lo menos 2 horas, después de este tiempo se retiran los hisopos quitando el exceso de caldo, presionándolos en las paredes de los tubos (es importante no agitar los tubos...