Instrumentos Y Técincas Para El Estudio De Las Células.

.5. INSTRUMENTOS Y TÉCINCAS PARA EL ESTUDIO DE LAS CÉLULAS.
Al ser las células muy pequeñas y notablemente complejas. Su estudio siempre depende de una serie de herramientas que se han desarrollado en tiempos relativamente recientes.
Los microscopios sirven para el estudio de la célula en su conjunto.
* Microscopio óptico.
Es un microscopio de luz transmitida (atraviesa la muestra) y seobserva en campo claro. Consta de los siguientes elementos.
En primer lugar hay una fuente de iluminación en la parte inferior del microscopio, en su esqueleto (estativo). La luz pasa a través de un condensador, formado por una o más lentes, que centra la luz condensando la iluminación. Por encima está la platina portapiezas con un agujero en el centro a través del cual pasa la luz. La platina sepuede desplazar con una serie de mandos.
Sobre la platina se dispone la muestra en una lámina denominada portaobjetos.
Después la luz pasa por el objetivo, el ocular y llega al ojo. El microscopio tiene una limitación fundamental que recibe el nombre de límite de resolución: es la distancia mínima a la cual dos puntos u objetos se pueden observar separados. Se ajusta a la siguiente ecuación:
L ·r = 0'61 / AN : longitud de onda
AN: apertura numérica. Característica del objetivo que se está empleando. AN= N · sen
N: índice de refracción entre la muestra y el objetivo.
Los mejores objetivos que existen en la actualidad tienen un ángulo =70º, sen 70º=0'94. El objetivo puede tener como máximo una apertura numérica de 1'4 en el medio ACEITE. La luz empleada es la luz visible y sulongitud de onda está entre 0'4-0'7 m.
0'4 zona del violeta 0'7 rojo lejano
L · r= 0'61 ·0'4 /1'4 = 0'2 m !límite de resolución
Teórico del microscopio óptico
Podemos ver partículas que tengan como diámetro 0'2 m o más, pero esto en la práctica es imposible.
El L · r real del microscopio óptico es de 0'5 m, y ese tamaño lo tiene una bacteria (procariota) o una mitocondria (orgánulo de eucariota).Son las estructuras más pequeñas que se pueden observar.
En la mayoría de los organismos las células forman tejidos y órganos (pluricelulares) y no pueden observarse directamente, sino que deben sufrir un tratamiento hasta poder observarlos al microscopio !PROCESO DE FIJACIÓN.
Durante este proceso se inmoviliza a las células matándolas pero preservándolas y la sustancia utilizada es el fijador.En términos químicos la fijación consiste en establecer puentes entre las diferentes macromoléculas que constituyen la célula, de forma que quedan situadas fijas en su posición original.
Por otra parte el fijador prepara a las células para la tinción (hace permeable a las células a los colorantes).
Hay que realizar rebanadas finas para poder observar los tejidos y órganos al microscopio. Seutilizan los microtomos. Existen diversos tipos, pero el más corriente es el microtomo de rotación.
En el brazo que sube y baja tenemos el tejido que queremos cortar, y para ello hay una manivela.
Cada vuelta de la manivela, el brazo se mueve un número determinado de m. Abajo hay una cuchilla que puede ser de acero, vidrio e incluso de diamante y el material depende del grosor de la sección quequeramos obtener. Cada vez que el brazo baja se corta una sección que se dispone en el portaobjetos.
El grosor de las secciones para microscopía óptica es de 1-10 m. Para microscopía electrónica las secciones tienen un grosor siempre por debajo de 0'1 m.
Los tejidos y órganos son estructuras muy frágiles y no pueden cortarse directamente con el microtomo (son blandos). Antes hay que realizar elproceso de INCLUSIÓN.
La inclusión consiste en sumergir los tejidos y órganos en una sustancia que se denomina medio de inclusión que cuando está en forma líquida penetra en el interior de un tejido. Ese medio de inclusión se puede volver sólido y al volverse sólido se obtiene un bloque duro y rígido que se puede cortar en el microtomo.
Existen dos tipos principales de medios de inclusión:
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