Insulina

La insulina estimula el transporte de glucosa en gran medida por la mediación de la
translocación del transportador de glucosa sensible a la insulina (GLUT4) de un
compartimento intracelular a la membrana plasmática. El uso de un solo
microinyección de células de adipocitos 3T3-L1, junto con la detección de
inmunofluorescencia de las proteínas de GLUT4, hemos determinado que la
inhibición dep21 endógena o la inyección de p21 oncogénica tiene ningún efecto
sobre la insulina estimula la translocación de GLUT4. Por otro lado, la
microinyección de anticuerpos anti-fosfotirosina o la inhibición de la endógena
fosfatidilinositol 3-quinasa mediante microinyección de una proteína de fusión SH2
GST-p85 inhibe notablemente este efecto biológico de la insulina. Estos datos
sugieren que lap21/ mitogen-activated proteína quinasa vía no está implicado en
este efecto metabólico de la insulina, mientras que la fosforilación de la tirosina y la
estimulación de la actividad de fosfatidilinositol 3-quinasa son componentes críticos
de esta vía de señalización.
INTRODUCCIÓN
La insulina ejerce efectos biológicos pleiotrópicos. Uno de los principales efectos
fisiológicos de la insulinaes la regulación de los niveles de glucosa en plasma, que
se logra mediante la supresión de la producción de glucosa hepática y la
estimulación de la captación de glucosa en los tejidos diana. Este último efecto es
debido principalmente a la translocación de transportadores sensibles a la insulina
de glucosa (GLUT4) de una piscina vesicular intracelular a la membrana
plasmática, donde sepueden llevar a la absorción de glucosa. Esta respuesta está
mediada por una vía de señalización metabólica que es divergente desde la vía
mitogénica y puede, al menos en parte, utilizar las moléculas de señalización
diferentes. La elucidación de esta vía de señalización producirá información rica
con implicaciones para un número de estados de enfermedad humanos, tales
como la diabetes mellitusno dependiente de la insulina, la obesidad y el síndrome
de ovario poliquístico. Todas estas condiciones están asociadas con la resistencia
a la insulina y la función de la disminución de transporte de glucosa estimulado por
la insulina como una manifestación importante. Por lo tanto, las causas de la
resistencia a la insulina en estos estados fisiopatológicos probable que implican
defectosen la vía de señalización metabólica por el cual la insulina provoca un
aumento en la captación de glucosa celular. Hemos utilizado solo microinyección
celular de los adipocitos 3T3-L1 y microscopía de inmunofluorescencia de las
proteínas GLUT4 para evaluar la vía de señalización transmembrana que conduce
a la insulina estimula GLUT4 translocación.
Procedimientos experimentales
MaterialesInsulina porcina fue proporcionado amablemente por Lilly. Anticuerpo anti-GLUT4
policlonales (F349) fue descrito previamente ( 6 ). Anticuerpo anti-GLUT4
monoclonal (1F8) era de Acres Biologicals Este ( 10 ). Anticuerpo anti-c-Fos
policlonal era de Oncogene Science. Anti-p21 monoclonal anticuerpo (Y13-259)
era de Santa Cruz Biotechnology. Anticuerpo policlonal anti-Shc y el anticuerpomonoclonal
anti-fosfotirosina
(PY20)
eran
de
Transduction
Laboratories. Recombinante T24 Ras ( ) y proteínas Ras N17 fueron generosos

regalos de JR Feramisco y fueron descritas anteriormente ( 8 ). Proteína de fusión
GST-p85 SH2 fue proporcionado amablemente por AR Saltiel, y su preparación y
uso se han descrito previamente ( 9 ). IgG de oveja y el isotiocianato de
fluoresceína, isotiocianatode tetrametilrodamina-, y anti-conejo conjugado con
AMCA-,-ratón, de rata-anticuerpos IgG, y-ovejas fueron de Jackson
Immunoresearch Laboratories Inc. Todos los demás reactivos fueron adquiridos de
Sigma.
La
inmunotinción
GLUT4 tinción Proteína

y

microscopía

de

fluorescencia

Las células se estimularon con insulina durante 20 min y después se fijaron en
formaldehído al 3,7%...