Intercambio Iónico

Alumnas: Beriotto, Agustina: Pavón Novarín Mariela. 

Trabajo Práctico IV: Intercambio iónico. 
 
 
Objetivos​
: 
●Aprender cómo utilizar la carga neta de una molécula (propiedad física propia) para 
aislarla de otras que presentan carga neta diferente. 
● Aprender a elegir la combinación de medios (resinas y buffers de siembra y elución) 
necesaria para optimizar la separación requerida. 
 
Metodología:  
Para la cromatografía de intercambio iónico, en primer lugar, se preparó la resina. En este 
caso, se utilizó la resina DEAE­celulosa de intercambio aniónico, la cual se encontraba suspendida en un buffer fosfato de sodio 25 mM pH 6,8 (Buffer de siembra). A esta suspensión 
de 5 ml se le agregó la mezcla proteica a separar, la cual era incógnita y podía estar compuesta tanto por lisozima y BSA como sólo por alguna de estas dos. Para que se diera una 
buena interacción entre la mezcla proteica y la resina se los mezcló por agitación suave por 5 
minutos. Una vez terminado el batch, se agregó la resina a la columna y para asegurar que se incorporó 
totalmente el batch, se lo lavó con 2 ml de buffer de siembra, los cuales fueron incorporados a la columna. Luego se abrió el clamp para dejar pasar la fase móvil y se comenzó a colectar el 
percolado de a 7 gotas en tubos de hemólisis numerados. Una vez que se acabó el buffer de siembra, se agregó y comenzó a eluir el buffer de elución (Buffer fosfato de sodio 25 mM pH 
6,8+NaCl 0,65 M). Nuevamente, se recolectaron las fracciones en tubos de hemólisis 
numerados cada 7 gotas. Para detectar la presencia de proteína, se utilizó el método de Bradford. Se tomó una placa 
multiwell y a cada pocillo se le agregaron 30ul de cada una de las fracciones y 170ul del 
reactivo de Bradford.  
 
Resultados: Se recolectaron 30 fracciones de 7 gotas cada uno y a cada una de estas, luego de agregar el 
reactivo de Bradford, se le asignó cualitativamente un número que describiera la intensidad del ...