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Introducción
En el siguiente laboratorio pondremos en práctica lo aprendido en el primer semestre con respecto a las variaciones en la cinética de una enzima y buscaremos además analizar suspropiedades, como la constante de Michaelis-Menten, o más conocida como Km.
Lo que buscaremos en este laboratorio es determinar la actividad de la fosfatasa ácida, con respecto a sus condiciones óptimas detrabajo y propiedades. Se ha elegido esta enzima, ya que posee una amplia especificidad de sustratos y además se encuentra una gran gama de este tipo de enzimas. La reacción a generar será lageneración de producto p-nitrofenol que en medio alcalino se encuentra como p-nitrofenolato y de fosfato inorgánico, a partir del sustrato artificial p-nitrofenilfosfato (pNPP), como se muestra en lasiguiente reacción:

Concretamente lo que se hará en este experimento está dividido en dos partes, en la primera se realizará una curva de calibración para el p-nitrofenol, con el cual calcularemos lasconcentraciones de producto para todas las experiencias siguientes, y se realizará usando el método fotocolorímetro. Además se hará un ensayo del tipo cinético, para lograr determinar cuál es la cantidadde enzimas apropiadas para la reacción. El ensayo de tipo cinético consta en determinar la concentración de sustrato o de producto de forma continua a medida que avanza el tiempo. Y se deben calcularlas distintas velocidades a las que se ha formado el sustrato, con las distintas concentraciones enzimáticas a prueba, en nuestro caso usaremos tres concentraciones enzimáticas. La concentración quede constante en todos sus tiempos será la apropiada para la reacción.
La velocidad inicial en este caso se calcula: velocidad de producto formado (µmoles, mmoles) / tiempo (min, hr)
En la segundaparte del experimento se estudiarán distintas propiedades para la fosfatasa ácida, como el pH óptimo, la constante de Michaelis-Menten y la inhibición por fosfato inorgánico.
El pH óptimo se estima...