Introducción Chiochio

Introducción
Dentro de la bioquímica la enzimología es de gran importancia. Una enzima es un catalizador biológico (proteína o RNA) altamente especializado. Aceleran las reacciones reduciendo la energía de activación [1], incrementando significativamente los choques efectivos entre las moléculas que van a reaccionar. Las enzimas no modifican la constante de equilibrio (Keq) ni la variación deEnergía Libre (ΔG) y tampoco catalizan una reacción endergónica sino que aceleran las reacciones termodinámicamente posibles. Además una vez que se forma el complejo enzima sustrato se produce un cambio conformacional que debilita los enlaces del sustrato y genera especies más reactivas. Estas características permiten que la enzima tenga una alta especificidad [2].
Para el estudio de laactividad de una enzima es importante considerar que existen ciertos factores que afectan su comportamiento y actividad enzimática, tales como temperatura, presión, pH, fuerza iónica, entre otros. Por ejemplo, Las enzimas trabajan a un pH óptimo, por sobre o bajo ese nivel su actividad disminuye. La velocidad de reacción (catalizada por la enzima) aumenta con la temperatura, pero llegando a cierto valorla enzima comienza a denaturarse, disminuyendo la velocidad de reacción (X)
Curva de progreso…
La β-galactosidasa es una enzima de gran importancia en estudios de bioquímica debido a que esta enzima es capaz de hidrolizar el enlace β-glucosídico de la lactosa produciendo glucosa y galactosa. El ONFG (o-nitrofenil- β--galactosido) es un análogo de la lactosa, que puede ser hidrolizado por estaenzima generando orto-nitrofenol (oNF) como producto que presenta una coloración amarilla la cual puede ser detectada por un espectrofotómetro a una longitud de onda (λ) de 420 nm[X].
Definir las condiciones experimentales para ensayar un sistema enzimático
Determinar la actividad de la β-galactosidasaEstudio de la velocidad de hidrólisis enzimática del ONFG por la β-galactosidasa en función deltiempo (curva de progreso)
CUESTIONARIO
1.- ¿Qué función cumple el carbonato de sodio en el sistema de ensayo de la β-galactosidasa?
Las enzimas trabajan a un pH óptimo, por sobre o bajo ese nivel su actividad disminuye. El carbonato de calcio es un compuesto que modifica el pH de la solución, aumentándolo y, por tanto, altera las funciones del sitio activo de la enzima, deteniendo la reacciónenzimática.
La función de detener la reacción enzimática, que cumple el carbonato de calcio, permite medir diversos factores presentes en el instante en que se agrega el compuesto, como la actividad enzimática, cantidad de sustrato o enzima, entre otros.
2.- ¿Cómo podría comprobar que una reacción química determinada es una reacción enzimática?
Mediante una curva de progreso. Por un ladotenemos la reacción catalizada por enzima, que se vería reflejado en el gráfico con un comportamiento lineal inicialmente, seguido de una meseta donde la reacción llega al equilibrio (velocidad de reacción enzimática se igual con velocidad de reacción reversa). Mientras que para una reacción no enzimática, se obtendrá un relación lineal sin presencia de meseta en el gráfico, ya que no se alcanza elequilibro antes mencionado.
Otra forma de comprobar la presencia de una reacción enzimática, seria medir la velocidad de una reacción frente a un cambio en la temperatura, ya que al aumentar la temperatura de la reacción hasta cierto límite, va a generar que la enzima se desnaturalice, provocando su inactividad. Mientras que para una reacción no catalizada, el aumento de temperatura favorecerá lavelocidad de la reacción
3.- Si desea determinar una actividad enzimática cualquiera en un extracto de tejido: ¿Qué controles haría? ¿Qué consideración debe tener en cuenta para fijar el tiempo de incubación?
En proceso…
1.- ¿Cómo afectan la forma de una curva de progreso: la concentración de sustrato, la concentración de enzima?
En términos de concentración de sustrato, si las concentraciones...