introduccion biotecnologia

BIOTECNOLOGÍA
TEMA 1: CONCEPTOS BÁSICOS: Ingeniería Genética y Genética Molecular
ÁCIDOS NUCLEICOS
Pentosa +enlace gluvosídico+ base nitrogenada= Nucleósido +enlace éster+ ácido fosfórico=Nucleótido

Pentosa:
Ribosa (ARN) grupo OH (2’) (A,G,C,U)
Desoxi-Ribosa grupo H (2’) (A,G,C,T)

El DNA polimeriza en el sentido 5’3’










El DNA tiene estructura de doble hélice antiparalela. Basesnitrogenadas hacia adentro. La doble hélice se estabiliza por puentes de hidrógeno entre las bases.
3 p. de hidrógeno
2p. de hodrógeno


FLUJO DE INFORMACIÓN GENÉTICA

Replicación
Transcripción
Retrotranscripción
Traducción: moléculas que van a llevar a cabo la función de los genes. Codifican genes.
GEN: unidad transcripcional (pasa de ADN a ARN)
Promotor:
Activa la transcripción de ungen
Fundamental para saber dónde y cuando se expresa un gen

Exón: forma el ADN maduro
Eucariota: monocistrónico (gen) un promotor regula la expresión de un único gen
Procariota: policistrónico, expresión de varios genes a la vez regulada por un mismo promotor.

REPLICACIÓN (5’3’)

DNA polimerasa
Complementariedad
C-G
A-T



TRANSCRIPCIÓN (5’3’) TRADUCCIÓN (AminoCarboxilo)


CÓDIGO GENÉTICOCodón inicial traducción

Terminación
El código genético está generado porque para el mismo aminoácido codifican varios tripletes de bases distintos.
Cada 3 bases se traduce un aminoácido.
3bases=1codón
TRADUCCIÓN
AUG empieza la traducción
(completar)
Optimización de codones: En la célula hay distinto número de ARNt para distintos codones. Optimizamos el codón para el qye hay más ARNt, así latraducción será mas eficiente, se traduce el mismo aminoácido.
Modificaciones post-traducionales: podemos modificar el lugar a donde van a ir esas proteínas.
Proteínas con péptido señal: van al R.Endoplasmático, pasan a su interior y pueden secretarse al exterior después de pasar por el aparato de Golgi.

SRP: reconoce el péptido señal y se une a este. El SRP se reconoce con un receptor en lamembrana y hace pasar la proteína al interior, después una proteasa elimina el péptido señal.




METODOLOGÍA BÁSICA
ELECTROFORESIS DE DNA, RNA Y PROTEÍNAS
Sirve para separar moléculas

Las proteínas se separan por cargas. En el gel habrá un extremo con un cátodo (-) y otro con un ánodo (+). Las moléculas van más rápido según tamaño, cuanto más pequeñas más rápidas. Las moléculas con carga negativa iránal ánodo y las + al cátodo.
Para visualizar el resultado se utiliza el bromuro de etidio (se introduce en la doble hélice del ADN). Si iluminamos con luz fluorescente somos capaces de visualizar las distintas bandas en un gel. DNA carga - , irá hacia el ánodo.

PCR. Reacción en cadena de la polimerasaconseguimos muchas moléculas del ác.nucleico que queremos



Las flechas rojas son los cebadoresy lo que hacen es una síntesis.


(completar)








Queremos amplificar un gen ( fragmento de ADN, secuencia de nucleótidos)
Necesitamos 2 cebadores o digonucleoticos (son dos secuencias complementarias a una secuencia que tenemos en nuestro gen. Los cebadores siempre van en dirección 5’3’ porque la polimeración ocurre en ese sentido. (cebador=oligonucleótido 15-20pb)
Reacción PCR:Desnaturalizar el DNA, separar las dos cadenas del ADN
Se unen los cebadores
La polimerasa sintetiza por complementariedad la hebra complementaria
Hay varios ciclos, voy duplicando la cantidad de DNA en cada ciclo de polimerización (30-40 ciclos) Es importante amplificar el número de moléculas para poder introducir un gen en otro organismo.



DESNATURALIZACIÓN Y RENATURALIZACIÓN DEL DNA
Desnaturalización:abrir las dos cadenas de DNA, esto se consigue aumentando la Tª, depende de la composición de las bases de cada molecula de ADN. A-T; C-G+ puentes de hidrógeno que lo estabilizan, necesitamos mayor temperatura para desnaturalizarlo. (80-85ºc)
Tª de melting (tm): temperatura a la que mitad de las moléculas de ese ADN están desnaturalizadas.
South-blot (DNA): Técnica para saber si en una mezcla de...