introduccion de inhibior de tripsisna

Introduccion
Muchos de los alimentos de consumo masivo como las legumbres, cereales, tubérculos, en estado crudo, contienen inhibidores de hidrolasas; específicamente se conocen los inhibidores de proteasas y de amilasas. En la mayoría de los casos, son proteínas cuyos pesos moleculares oscilan entre los 6 000 y 50 000 Dalton y representan del 0,2 al 2% de las proteínas solubles de laslegumbres (Nuria Bolaños, 2003).
En el caso de los inhibidores de tripsina, son sustancias de carácter proteico que en presencia de una proteasa y un sustrato producen una notoria disminución en la velocidad de la reacción catalizada por la enzima. En la soya se encuentran diferentes tipos de estos inhibidores, de los cuales se destacan el de Kunitz y el Bowman-Birk, que constituyen aproximadamente un15% de las proteínas de la semilla, en el caso del camote la acción inhibitoria de tripsina está asociada a compuestos como las betalaínas.La acción de estos inhibidores afecta notablemente a las enzimas digestivas y se evidencia en su hipertrofia ante la ingestión continua de alimentos con el inhibidor activo (Cheftel,1989).Por esta razón es que se requiere de tratamientos que reduzcan la actividadinhibitoria de dichas sustancias tanto para la dieta humana como animal. Y ya que los inhibidores de tripsina son de naturaleza proteica pueden ser desnaturalizados, como menciona Nuria Bolaños (2003), los inhibidores de proteasas son termolábiles, por lo que se pueden inactivar, en mayor o menor grado, por la acción de tratamientos térmicos.Es por esta característica que los métodos utilizadosen la desactivación de inhibidores de tripsina están basados en el uso de calor y entre los mas comunes podemos encontrar a la extrusión, el vapor, el tostado y la cocción.
Objetivos
El objetivo de la presente practica es comprobar el efecto de la temperatura sobre la actividad de inhibidor de tripsina comparando los resultados de diferentes muestras cada una sometida a una temperaturadiferente.

Marco teórico
EL principio básico para desactivar al inhibidor de tripsina es la desnaturalización, la cual es la perdida de la estructura tridimensional suficiente para originar la perdida de la función (L.Nelson & M. Cox, 2009), Esto se consigue por diversos mecanismos en este caso es el sometimiento al calor. Al analizar el efecto causado por el calor sobre el inhibidor de tripsina sedebe tomar en cuenta tanto la temperatura empleada como el tiempo de tratamiento ya que estos factores pueden afectar la estabilidad de dicho inhibidor, según Van den Hout .R, (1998), La estabilidad térmica de estos depende de su peso molecular y de la cantidad de uniones disulfuro presentes en la proteína; estos enlaces estabilizan la conformación activa del inhibidor. Él proceso comienza con laextracción del inhibidor y su exposición a una temperatura determinada en un lapso de tiempo, como ya se mencionó anteriormente, esto afectara al inhibidor que posteriormente será agregado junto con la enzima para medir la actividad de enzimática en presencia de inhibidor y así poder compararla con un estándar sin factor antinutricional. La actividad inhibitoria se expresa en unidades de tripsinainhibidas (UTI) por miligramo de muestra ,considerando un incremento de absorbancia de 0.01 como 1 unidad de tripsina (Aliaga, 2014).


Materiales Y Métodos
Equipos y Materiales
* Espectrofotómetro
* Potenciómetro
* Agitador Magnético
* Cronometro
* Baño María
* Vortex
* Pipetas automáticas y graduadas
* Tubos de ensayo
* Matraces de 250 mL
* Fiolas de 25 y 100 mL
* Gradillas
* Papelde filtro Whatman N°2
Reactivos
1. Buffer tris 50 mM, pH 8.2
2. Solución Stock de tripsina. Pesar 10 mg de tripsina porcina cristalina (tipo IX, sigma) en 50 ,L de HCl 1mM, conteniendo 2,5mM Cl2Ca. La solución se mantiene en refrigeración, es estable por 7 dias.
3. Solución estándar de tripsina, tomar 2mL de la solución stock y agregar la solución de HCl con Cl2Ca hasta completar un volumen...