Introduccion Reparad Lab 2


UNIVERSIDAD DE ORIENTE NUCLEO BOLIVAR
ESCUELA DE CIENCIAS DE LA SALUD DEPARTAMENTO DE CIENCIAS FISIOLOGICAS
CATEDRA: BIOQUIMICA





PRATICA 2
“SALADO” (SALTING OUT) DE PROTEINAS, SU APLICACIÓN EN LA SEPARACION Y DETERMINACION DE ALBÚMINA Y GLOBULINAS EN SUERO O PLASMA SANGUINEO.
Mesón N°2








Docente:Bachilleres:
Dr. Miguel Basanta Juan Cardozo CI: 22822806
Ricardo Machado CI:
Liliana Sotillo CI:
Daniel CI:













Ciudad Bolívar, Mayo del 2015
Introducción.
Las proteínas son las moléculas más versátiles de los seres vivos y desempeñan funciones cruciales encasi todos los procesos biológicos. Funcionan como catalizadores, transportan y almacenan otras moléculas, proporcionan apoyo mecánico, protección inmunológica entre otras.
Las proteínas son polímeros constituidos a partir de monómeros llamados aminoácidos, unidos por enlaces peptídicos, se construyen a partir de una colección de 20 aminoácidos, Todas las proteínas están compuestas por carbono,hidrogeno, oxigeno y nitrógeno, algunas pueden contener también azufre, fosforo, hierro, cobre entre otros elementos.
Las proteínas totales mide la cantidad total de dos clases de proteínas encontradas en la porción liquida de la sangre: albumina y globulinas.
Sabiendo que las proteínas totales se miden en suero, siendo el resultado de sumar los distintos componentes proteicos presentes en elorganismo, su función es mantener la presión osmótica coloidal del plasma, mientras que albumina es una proteína soluble en agua, que se encuentra en gran proporción en el plasma sanguíneo, constituye mas de la mitad de todas las proteínas séricas en cuanto que las globulinas son una parte importante en el sistema inmunitario, Se debe mencionar que la albumina y las globulinas dependen de susdiferentes solubilidades en sales neutras para su separación. Las globulinas son precipitadas en soluciones saturadas de sulfato de sodio o sulfato de amonio. Mientras que la albumina se precipita en soluciones salinas
El salting out es una técnica utilizado para la separación de proteínas, como la albumina y la globulinas en el suero humano, esta técnica consiste en concentrar la fase liquidatanto como sea requerido para que las proteínas se precipiten, lo que se produce es que al solubilizar la sal, esta se rodea de agua, limitando las moléculas que solubilizan a las proteínas, logrando que al final no hayan moléculas disponibles de agua precipitando las proteínas.
Existen varios métodos para la determinación de concentraciones de proteínas en una muestra, tales como ladeterminación de la absorbancia, mediante la formación de derivados coloreados de las proteínas, base del método de Biuret, en este caso se forma un complejo coloreado de cobre con el enlace peptídico.
La cuantificación de proteínas presentes en los medios biológicos (sangre, suero orina, etc.), es utilizada como prueba complementaria para ayudar en diagnósticos de ciertas patologías de acuerdo a losvalores normales .Los valores normales de las proteínas totales oscilan entre 7 y 8,5 mientras que los valores de la albumina se encuentra entre 3.4 y 4.7 g/dl constituyendo un 60% de las proteínas plasmáticas, los valores de la globulina oscilan entre 2.5 a 3.7 g/dl, valores fuera de estos rangos se asocian a diversas patología que pueden sufrir el ser humano.



Resultados

Tabla 1: Valores pararealizar la curva de calibración de proteínas, obtenidos a través del método de Biuret.
Tubos
3
4
5
6
1

M(Pt)

-

-

-

-

0,1

St(ml)
8mg/ml

0,25

0,50

0,75

1,00

-

NaCl

1,75

1,50

1,25

1,00

0,9

Biuret

4 ml

4 ml

4 ml

4 ml

4 ml
Incubar a 50ºC por 10 minutos.

Lectura a
580 nm

0,140

0,256

0,296

0,376

0,364
Fuente: Datos obtenidos en el laboratorio de bioquímica, Mesón 2 UDO,...