Introduccion A Los Inmunoensayos

Septiembre de 2011

Inmunoensayo es una prueba que usa complejos de anticuerpo y antígeno como medio para generar un resultado perceptible. Un complejo antígeno-anticuerpo también es conocido como inmuno-complejo.

“Inmuno” se refiere a una respuesta inmunológica que hace que el cuerpo genere anticuerpos, y “ensayo” se refiere a una prueba. Entonces, un inmunoensayo es una prueba que utilizainmunocomplejos cuando se unen anticuerpos y antígenos.

Los Inmunoensayos se diferencian de otros tipos de pruebas de laboratorio, como las pruebas colorimétricas, ya que usan complejos antígeno-anticuerpo para generar una señal que pueda medirse. En oposición; la mayoría de las pruebas de rutina de química clínica utilizan reacciones químicas entre el reactivo (solución de sustanciasquímicas u otros agentes) y la muestra del paciente para generar un resultado de la prueba.

Anticuerpo es una proteína producida por el cuerpo en respuesta a una sustancia “invasora” (extraña). Los anticuerpos se producen como parte de la respuesta inmunológica del cuerpo para protegerse. Es también el caso, por ejemplo, de algunos test de inmunoensayos para determinar la presencia de anticuerposcontra las moléculas de cáncer. Así, si los anticuerpos están presentes, significa que las células invasoras de cáncer también lo están. Antígeno es la sustancia que el cuerpo está tratando de “combatir” (eliminar o reducir) preparando una respuesta inmunológica. Algunos test de inmunoensayos determinan la presencia de antígenos directamente, en vez de buscar anticuerpos. En un análisis para medir laconcentración de una droga terapéutica, por ejemplo, la droga es el antígeno que se une al anticuerpo.

Los anticuerpos poseen una alta especificidad y afinidad para un antígeno específico. Es la unión específica de un anticuerpo a un antígeno lo que permite la detección de analitos por medio de una variedad de técnicas de inmunoensayo.

Todos los inmunoensayos requieren el uso de materialmarcado para medir la concentración de antígeno o anticuerpo presente. Una marca es una molécula que reacciona como parte del ensayo, por lo tanto un cambio en la señal puede medirse en la sangre - reactiva.

Los ejemplos de marcas incluyen un compuesto radioactivo, una enzima que hace que cambie el color de una solución, o una sustancia que produzca luz. La marca puede aplicarse durante lafabricación del reactivo tanto al anticuerpo (Ab*, ver Figura 1-5) como al antígeno (Ag*, ver Figura 1-6). Las tecnologías de inmunoensayo utilizan diferentes formatos para distinguir el complejo antígeno-anticuerpo de la marca libre no unida.

La medición del analito en un inmunoensayo se logra usando tanto un formato competitivo como uno no competitivo. En los formatos competitivos, el analitosin marcar (generalmente antígeno) en la muestra se mide por su capacidad para competir con un antígeno marcado en el inmunoensayo. El antígeno sin marcar bloquea la capacidad del antígeno marcado de unirse puesto que ese punto de unión en el anticuerpo ya se encuentra ocupado.

Así, en un inmunoensayo competitivo, el hecho de que se mida menos marca en el ensayo significa que hay más antígenomarcado (muestra) presente. La concentración de antígeno en la muestra está inversamente relacionada a la concentración de marca que se mide en el formato competitivo (Figura 1-7).

En el formato competitivo de un solo paso (ver Figura 1-8), tanto el reactivo del antígeno marcado (Ag*) como la muestra sin marcar (o analito de la muestra) compiten por una cantidad limitada de anticuerpo.

En elformato competitivo de dos pasos, la concentración de anticuerpo del reactivo se encuentra presente en exceso comparada con la concentración de antígeno. El reactivo del anticuerpo primero se incuba con una muestra que contenga antígenos de interés, luego en el segundo paso, se agrega el antígeno marcado.

Los formatos de ensayos competitivos de dos pasos proporcionan una sensibilidad...