Investigació de enzims

TÍTOL
INVESTIGACIÓ D’ENZIMS
Informe nº 7
Iniciat: 11/11/2015
Acabat: 25/11/2015
Total hores: 6

Nom:

Lidia Cuevas, Josep Barriga i Xavi Sánchez.

Curs:

2015/2016

Professors:

Marga Costa i Elba Pélaez

Acció enzimàtica de la ptialina.
1. Objectiu


Determinar l`actuació de l`enzim ptialina, també anomenat amilasa, en diferents
condicions de temperatura i de medi.

TÍTOL

Visualització
1.1Materials cèl·lula animal
Material de vidre:
- 10 tubs d’assaig.
Material divers:
- Gradetes.
- Saliva.
- Aigua destil·lada.
- Midó.
Aparells:
-

Bany Maria.
Nevera.

Marca: Branson

Modelo: 1510

Reactius:
Hidròxid de sodi

Fórmula: NaOH
Massa molar: 39,99713 g/mol
Densitat: 2100 kg/m3 ; 2,1 g/cm3
Punt de fusió: 245 C

Àcid clorhídric

Fórmula: HCl
Massa molar: 36,46094 g/mol
Densitat: 1,09 g/cm3 a20°C

Lugol (Merck)

Fórmula: KI3
Massa molar: 419.81171 g/mol, I2=3,4
g/l KI=6,8 g/l
pH 3,5,
Densidad relativa 1,01 g/cm³ a 20 °C,

Reactiu de Fehling A

Reactiu de Fehling B

1.2 Mètode
En un primer got de precipitats es posen 25 ml d`aigua destil·lada molt calenta. Per
altra banda es prepara en un segon got de precipitats una barreja amb tres
culleretes de midó en 45 ml d’aigua destil·lada atemperatura ambient. Es barreja la
pasta freda del segon got amb l’aigua calenta del primer, afegint petites quantitats,
a la vegada que remenem contínuament fins aconseguir una barreja homogènia. Es
prenen quatre dels cinc parells de tubs d’assaig i es posa una mica de saliva a
cadascun (el mateix volum aproximat). Aleshores s`ha de fer el següent en cada
parell de tubs:

1. S`afegeix 4 ml de midóa la primera parella de tubs i s`escalfa a 37 ºC al bany
Maria.
2. S`afegeix 4 ml de midó a la segona parella de tubs i es posa a 4 ºC a la nevera.
3. S`afegeix unes gotes d’HCl, (aproximadament 5 ml, 1M) a la tercera parella de tubs
i després s`afegeixen 4 ml de midó. Es neutralitza amb unes gotes de NaOH,
(aproximadament 5 ml, 1M) i es posa la parella de tubs a 37 ºC al bany Maria.
4. Es posa ala flama del Bec Bunsen, la cuarta parella de tubs, on previament hem
posat la saliva, fins que arribi a ebullició. Després d`ebullició, s`afegeixen 4 ml de
midó i es posa la parella de tubs a 37 ºC al bany Maria.
5. Es posen 4 ml de midó, (sense saliva), i es posa la parella de tubs a 37 ºC al bany
Maria.
Es deixen les 5 parelles de tubs uns 15-20 minuts, al bany Maria o nevera segons elestablert anteriorment. Passat el temps d`espera, es pren el primer tub de cada
parella i s`afegeix unes gotes de lugol (dissolució de iode i iodur potàssic) per
determinar la presència o no de midó en la barreja. (la prova és positiva si el lugol
vira a blau-violeta). Al segon tub de cada parella s`afegeix 1 ml de solució de
Fehling A i 1 mL de solució de Fehling B i s`escalfa moderadament a la flamadel Bec
Bunsen, (la prova és positiva quan el color blau inicial vira a un color ataronjat que
indica la presència de sucres reductors).

1.3

Resultats

10 minuts després d`afegir lugol.

10 minuts després d`afegir reactiu de Fehling A i B.

Taula de resultats:
Reactiu

1ª
parella

2ª
parella

3ª
parella

4ª
parella

5ª
parella

Lugol

No hi ha
reacció.

Reacció
positiva.

Reacció
positiva.Reacció
positiva.

Reacció
positiva.

Fehling
AIb

Reacció
positiva.

No hi ha
reacció.

No hi ha
reacció.

No hi ha
reacció.

No hi ha
reacció.

1.4 Conclusions
L`objectiu de la pràctica ha estat favorable, hem pogut observar quines son les
condicions de temperatura y medis òptims on l`enzim ptialina pot actuar.
L`enzim només a actuat a la primera parella de mostres, on hem pogut observar que en
lamostra que hem agregat lugol, no ha reaccionat, per tant, no hi ha mido perquè
l`enzim l`ha degradat, i l`altra mostra on havíem agregat el reactiu Fehling A i B, tenim
una reacció positiva, el que ens confirma que hi ha glucoses, per tant, l`enzim si que ha
actuat. L`enzim només ha actuat a la primera parella perquè la temperatura de 37ºC,
es la seva temperatura optima d`actuació.
Observem que a...