investigacion

ISSN 1988-6047

DEP. LEGAL: GR 2922/2007 Nº 14 – ENERO DE 2009

ESTUDIO MICROBIÓLOGICO DE LA ORINA:UROCULTIVO
AUTORIA
ROSARIO ALORS CORREDERAS
TEMÁTICA
MICROBIOLOGÍA
ETAPA
FORMACIÓN PROFESIONAL

Resumen
Esta práctica que está encuadrada dentro del ciclo formativo de grado superior: Laboratorio de
Diagnostico Clínico, se hace necesaria para que el alumno alcance las capacidadesterminales de
dicho ciclo y en definitiva obtenga el titulo.
Palabras clave
Urocultivo, sedimento, sobrenadante, tinción.
UROCULTIVO:
Este tipo de análisis se hace cuando se sospecha una infección de cualquier parte del sistema urinario.
La flora o microbiota normal o residente se encuentra en la parte baja de la uretra; en cualquier otra
parte, sería una infección. El urocultivo comprendevarias etapas:
Sedimento urinario: centrifugamos la muestra de orina. Trabajaremos con 2 muestras, de las cuales una
es una muestra original y la otra es una muestra que hemos contaminado.
a)De la orina original tomamos 5ml y lo ponemos en un tubo de fondo cónico. Centrifugamos 5 minutos
a 1500rpm.
b)En el caso de la orina contaminada, ponemos 1,5ml en un tubo eppendorf y centrifugamos en lamicrocentrifuga algo menos de 5 minutos.
Una vez sedimentado, quitamos el sobrenadante, dejando un poco para poder resuspender el
sedimento. Y ya tenemos la muestra para trabajar con ella y observar al microscopio en fresco o con
tinción de Gram.
+Preparación en fresco: con la pipeta de 100 l. Pipeteamos y ponemos una gota en la superficie de
un porta y cubrimos con un cubre. Esto se puedeobservar al microscopio con objetivo de 40x y con
poca luz.
En este tipo de preparación podemos ver:
*Tipos de cristales en diferentes campos. Si aparecen con relativa frecuencia, podría ser
indicativo de cálculos renales o afecciones de la parte superior del sistema excretor.
Cristales de urea: tienen morfología cuadrada.
Cristales de oxalato: morfología en sobre.
Cristales de fosfato:morfología en ataúd.
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*Restos de epitelio en forma de masas irregulares o células en descamación del epitelio excretor.
Estas células tienen la morfología de un “huevo frito”, desgarbadas e irregulares. Cuando se presentan
en gran cantidad, puede serindicativo de infección.
*Detección de bacteriuria en el sedimento: presencia de bacterias en la orina.
*Piuria: presencia de leucocitos: Hay que tener en cuenta el número de polimorfonucleares
(PMN) y, dentro de éstos, los neutrófilos por campo de visión. Desde que sean 10-12, ya hay piuria
manifiesta.
*Hematuria: medimos la presencia de glóbulos rojos en la orina.
*En este examen tambienpodemos medir el pH, ver el aspecto de la orina.
+Tinción de Gram:
 Fundamento: divide a los microorganismos en Gram positivas y Gram negativas. Las Gram
positivas son aquellas que resisten la acción de colorante del disolvente alcohol-acetona, tras el
tratamiento con un colorante básico y lugol, mientras que las Gram negativas son decoloradas
siendo posteriormente teñidas con un colorante decontraste como puede ser la fucsina diluida o
safranina, este hecho se debe a la diferente composición de la pared celular. Es conveniente
realizar la tinción de gram sobre células de cultivos jóvenes ya que algunos microorganismos son
gram positivos solo en la fase de crecimiento.
 Material: portaobjetos, mechero, asa de platino, pipeta, pinzas de madera, microscopio óptico y
equipos detinción (cristalizador, barras paralelas y frascos lavaderos).
 Reactivos: lugol, cristal violeta, fucsina diluida o safranina, alcohol 96º, aceite de inmersión.
 Técnica:
1º. Realizar la preparación con la correspondiente fijación.
2º. Aplicar sobre el porta el primer colorante: cristal violeta durante 1 minuto.
3º. Lavar con agua.
4º. Añadir la sustancia mordiente, que en este caso es el...