Investigacion

BIOLOGIA MOLECULAR

Alumnos: Alejandro Mendoza Bautista José Manuel Orozco Escalante

Técnicas inmunológicas
Se basan en reacciones específicas:
 Ag (componente a valorar)- Ac (reactivo)Métodos inmunológicos


Inmunofluorecencia


Reacción inmunológica medida con un marcador fluorescente.

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Radiactividad

(radiainmunoensayo)

 Proporciona una señal que indica si unAg o Ac

esta presente en la muestra.



E.L.I.S.A. Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas



Uso de antígenos o anticuerpos marcados con una enzima, y medida por colorimetría.Protocolo General.

Tipos de E.L.I.S.A.


• Anticuerpos marcados:
 ELISA Directo  ELISA Indirecto  ELISA sándwich
○ Doble (DAS) ○ Heterólogo (HADAS)



• Antígenos marcados:
 ELISAcompetitivo

Pasos generales de un ELISA.
 

1. Tapizado del pocillo con el antígeno o anticuerpo. 2. Adición de la muestra problema con la mezcla de antígenos o anticuerpos. 3. Unión delantígeno o anticuerpo específico al anticuerpo o antígeno tapizado en el pocillo.





4. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de antígeno o anticuerpo no unido.
5. Adición del anticuerposecundario marcado con la enzima. 6. Unión del anticuerpo secundario al antígeno o anticuerpo. 7. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de enzima no unida. 8. Adición del substrato. 9. Unión delsubstrato a la enzima. 10. Desarrollo del color.

     

PASO1
Adsorción de antígenos anticuerpos.
 Dilución del anticuerpo

en tampón carbonato (pH 9,6) e incubación posterior durante3h a 37°C o 16h a 4°C.
 Tratamiento a 40-50°C

en tampón fosfato (PBS) o en agua fisiológica tamponada pH 7,2-7,4 hasta desecación.

PASO 2
Posterior a la adsorción del Ac, se realiza unlavado para retirar el exceso de Ac que no se ha fijado al pocillo.



Solución salina con Tween 20 como agente tensioactivo:
 NaCl

8,5gr  Tween 20 0,5mL  Agua destilada
1000mL

PASO 3...