Investigación de Listeria monocytogenes

OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN
El método utilizado lo utilizamos para la detección de la presencia o ausencia de Listeria Monocytogenes en productos cárnicos y derivados destinados a la alimentaciónhumana, en 48 horas.
El límite de detección de este método es de 1 ufc/25 g.
FUNDAMENTO
El fundamento de dicho método esta basado en el mismo que el recuento de Listeria, debido a que es el mismomicroorganismo la diferencia de estas diferentes técnicas, es que con el recuento queremos obtener unos valores aproximados sobre la presunta presencia. Sin embargo con la investigación nos ceñiremosa confirmar o desmentir su presencia.
TOMA DE MUESTRA
Descrita en el punto 2, procesamiento de la muestra.
REACTIVOS
-Caldo Half Fraser (Caldo comercial).
-Agar Listeria (ALOA) (Placascomerciales).
-Agar Sangre (Placas comerciales).
Uso de cepas para la identificación de la Listeria:
-Cepa de L.monocytogenes.
-Cepa de S. aureus.
-Cepa de Rhodococcus.
MATERIALES Y EQUIPOS
Estufa decultivo 371ºCy a 301ºC, Granatario, cabina de flujo laminar, autoclave, baño termostático, pipeta automática de 10-100l, puntas estériles, placas petri, asas de siembra, bolsas stomacher estériles ydiluidor automático.
PROCEDIMIENTO
25 g de alimento + 225 ml de Caldo Half Fraser (Solución madre 1:10)

Triturar

Sembrar con asa de siembra estéril enALOA

Incubar a 37ºC durante 24h

Confirmar mediante el Test de CAMP
IDENTIFICACIÓN
Examinamos las placas de agar ALOA después de la incubación parainvestigar la presencia de colonias típicas de Listeria monocytogenes. Las colonias típicas que crecen en este agar son de color verde-azulado, rodeadas de un halo opaco.
Si el desarrollo fueradébil y no se observa el desarrollo de las colonias típicas de Listeria monocytogenes, proseguiremos la incubación de las placas durante 24 horas más volviendolas a examinar transcurrido el tiempo....