ISAV materiales y metodos
Páginas: 4 (964 palabras)
Publicado: 15 de abril de 2013
Materiales y métodos
Recoger muestra
Recogieron 20 salmones Atlánticos muertos que habían crecido por 2 años en aguas marinas de un sitio en New Brunswick, Canada, lo cual había sufrido nivelesmortales muy altas. Investigaciones previas del sitio confirmaron que HKS con una agente vírica podía haber sido la causa. Recogieron muestras sólo por pruebas de virus y tejido. Muestras detejido fueron sacadas de cada uno de los 20 peces. Muestras del riñón posterior fueron sacadas de cada pez para histopatología y puestas en 3 tazas que contenían 10% phosphate buffered formalin (1:10w/v). Para la virología, las muestras de los riñones y bazo (approx 1 cm3) fueron sacadas y puestas en tazas que contenían 20 ml de phosphate buffered saline (PBS) pH 7,1. Trozos del tejido de variospeces fueron puestos en cada taza. Dos conjuntos de 7 peces y un conjunto de 6 peces eran recogidos dos veces. Los conjuntos para aislamiento de virus fueron puestos en hielo inmediatamente después desacarlos. Un conjunto de tejido para pruebas virológicas y otro conjunto para pruebas histológicas fueron mandados a la Universidad de Maine en Orono, Maine, USA. Allá las muestras para análisisvirológico eran congeladas inmediatamente. El segundo conjunto de tejidos para pruebas virológicas eran mandadas a Micro Technologies, Inc en Richmond, ME, USA. Allá esperaban una noche en 5 gradosCelsius. Resultados de esa muestra están abajo.
Procesamiento de conjunto de tejido.
Los 3 conjuntos de tejido eran homogeneizados (Steward Stomacher 80) y una dilución de 1:10 (w/v) fue preparada enPBS pH 7,1. Estos homogeneizados eran diluidos al final en una dilución de 1:100 (v/v) en Minimum Essential Medium (MEM) con los sales equilibrados de Hank, 5% suero de bovino (FBS) y gentamycin (50ug ml-1) pH 7,2. Esta dilución final fue filtrada a través de un filtro de 0,45 um para sacar contaminación bacteriana.
Preparación del cultivo de células.
Una placa para cultivos de...
Recoger muestra
Recogieron 20 salmones Atlánticos muertos que habían crecido por 2 años en aguas marinas de un sitio en New Brunswick, Canada, lo cual había sufrido nivelesmortales muy altas. Investigaciones previas del sitio confirmaron que HKS con una agente vírica podía haber sido la causa. Recogieron muestras sólo por pruebas de virus y tejido. Muestras detejido fueron sacadas de cada uno de los 20 peces. Muestras del riñón posterior fueron sacadas de cada pez para histopatología y puestas en 3 tazas que contenían 10% phosphate buffered formalin (1:10w/v). Para la virología, las muestras de los riñones y bazo (approx 1 cm3) fueron sacadas y puestas en tazas que contenían 20 ml de phosphate buffered saline (PBS) pH 7,1. Trozos del tejido de variospeces fueron puestos en cada taza. Dos conjuntos de 7 peces y un conjunto de 6 peces eran recogidos dos veces. Los conjuntos para aislamiento de virus fueron puestos en hielo inmediatamente después desacarlos. Un conjunto de tejido para pruebas virológicas y otro conjunto para pruebas histológicas fueron mandados a la Universidad de Maine en Orono, Maine, USA. Allá las muestras para análisisvirológico eran congeladas inmediatamente. El segundo conjunto de tejidos para pruebas virológicas eran mandadas a Micro Technologies, Inc en Richmond, ME, USA. Allá esperaban una noche en 5 gradosCelsius. Resultados de esa muestra están abajo.
Procesamiento de conjunto de tejido.
Los 3 conjuntos de tejido eran homogeneizados (Steward Stomacher 80) y una dilución de 1:10 (w/v) fue preparada enPBS pH 7,1. Estos homogeneizados eran diluidos al final en una dilución de 1:100 (v/v) en Minimum Essential Medium (MEM) con los sales equilibrados de Hank, 5% suero de bovino (FBS) y gentamycin (50ug ml-1) pH 7,2. Esta dilución final fue filtrada a través de un filtro de 0,45 um para sacar contaminación bacteriana.
Preparación del cultivo de células.
Una placa para cultivos de...
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