isoelectroenfoque

Integrantes: Mariana Silva, Sol Vidal, Analia Gomez

Isoelectroenfoque
Definición:
Isoelectroenfoque (IEF) se trata de un tipo de electroforesis que se emplea para separar moléculas cargadas.Fundamento:
Una proteína tiene grupos cargados de ambas polaridades, por lo que presenta un punto isoeléctrico, el pH
al que es inmóvil en un campo eléctrico. Las proteínas que se encuentran enregiones de pH inferior a su
punto isoeléctrico estarán cargadas positivamente y migraran hacia el cátodo, mientras aquéllas que se
encuentran en medios con pH más altos que su punto isoeléctrico tendráncarga negativa y migrarán hacia el
ánodo.
Cuando se aplica una diferencia de potencial se da el desplazamiento de las moléculas en un gradiente de pH
hasta igualar su punto isoeléctrico (pI).Técnica
La técnica consiste en que se establece un gradiente de ph generado por la mezcla de dos buffer diferentes en
relaciones variables en un gel de poliacrilamida levemente entrecruzado en forma decilindro o lamina que
suele tener Urea de concentración cercana a 6M., que es un poderoso agente desnaturalizante de proteínas,
y a diferencia del SDS no posee carga y no puede afectar en formadirecta la carga de las proteínas. Luego se
coloca la muestra (mezcla de proteínas) y se aplica una diferencia de voltaje logrando el desplazamiento de
las proteínas cargadas hasta que sus puntosisoeléctricos igualen al pH, después de un tiempo determinado en
el caso de utilizar una lamina no necesitamos revelar y en el caso que usemos cilindro para visualizar las
bandas se tiñe con azul deCoomassie.

Integrantes: Mariana Silva, Sol Vidal, Analia Gomez

Técnica en Columna:

Técnica en Lámina:

Aplicaciones:
La capacidad del IEF de separar las proteínas en bandas definidas lo haceútil como herramienta
analítica y preparativa. Varias preparaciones proteicas que se creían homogéneas se separaron en
varios componentes mediante isoelectroenfoque.
Una de las aplicaciones más...