JENNY

LABORATORIO DE EXTRACCION DE CASEINA Y DETERMINACION DEL PUNTO ISOELECTRICO

Jenny Carolina Dueñas y Zulma Milena Monroy
Corporación Tecnológica De Bogotá
Laboratorio de Bioquímica

RESUMEN
En la práctica de laboratorio se tomo 100 ml de leche en un Erlenmeyer y 50 ml de agua destilada, se sometió en ≈ 38°C y agregamos gota a gota acido acético al 1M hasta formación de precipitado(separación del suero de la nata) luego se filtro y tomamos de 500 mg del precipitado que se disolvió con 40 ml NaOH al 1M llevando a un balón 100 ml y aforando con agua destilada, quedando una solución turbia después de la agitación y se filtro nuevamente para lograr una solución mas translucida, mientras los otros grupos prepararon 8 soluciones buffer de diferente concentración (acetato de sodio 0.1M yAcido actico 0.1M), se tomo 10 ml de cada buffer preparada en 8 tubos de ensayo respectivamente y agregamos a cada tubo 1 ml de la solución de caseína preparada, agitamos y comenzamos a medir la absorbancia con el espectrofotométrico a una longitud de onda de 640 nm y registrando los datos obtenidos en una grafica de absorbancia Vs pH, para hallar el punto isoeléctrico de la caseína.
Palabrasclaves: Caseína, ¶Extraer, precipitar, buffer, pH, espectrofotómetro y punto isoeléctrico.

INTRODUCCION
Las proteínas son sustancias orgánicas muy complejas presentes en toda la materia viva. Todas las proteínas contienen además de carbono, hidrógeno, también nitrógeno y a menudo azufre y fósforo.
Todas las proteínas se componen básicamente de 20 unidades estructurales denominadas aminoácidosunidos por enlaces peptídicos provocando características específicas en cada una.
Las propiedades de las proteínas se ven afectadas por modificaciones en el pH, la absorción de proteínas mediante intercambio iónico depende del pH, es decir de valores de pH por abajo del punto isoeléctrico la carga neta de la proteína es positiva y la molécula se ve absorbida con mayor fuerza en intercambiadorescatiónicos como la carboximetil celulosa sódica. Esta propiedad permite la separación y la purificación de proteínas mediante cromatografía de intercambio iónico. La movilidad de las moléculas de proteínas en un campo electrostático también depende del valor de pH. Esta propiedad permitió desarrollar la técnica de la electroforesis que es una de las más utilizadas en la investigación deproteínas.

La caseína es una proteína conjugada de la leche del tipo fosfoproteína que se puede separar de la leche por acidificación y forma una masa blanca. Los fosfoproteínas, son un grupo de proteínas que están unidas químicamente a una sustancia que contiene acido fosfórico, en la caseína la mayoría de los grupos fosfatos están unidos por los grupos hidroxilos de los aminoácidos serina y treuninaMETOLOGIA

EXTRACCION DE LA CASEINA

Caliente en un Erlenmeyer 100 ml de leche y 50 ml de agua destilada hasta que este a 38 °C.
Agregar gota a gota acido acético al 1M hasta formación de precipitado (caseína).
Filtre en un sistema de embudo y papel filtro.
Pese 500 mg de la caseína lleve a un balón 100 ml, adicione 40 ml de hidróxido de sodio a 1M y afore con agua destilada, homogenice.Si presenta turbidez, filtre nuevamente.

DETERMINACION DEL PUNTO ISOELECTRICO

En ocho tubos de ensayo debidamente marcados, secos y limpios, adiciones 10 ml de buffer preparadas respectivamente, según la siguiente tabla:


Añada en cada tubo 1 ml de la solución de caseína anteriormente preparada.
Agite suavemente, mida la absorbancia de cada tubo a 640 nm, previamente descontando elblanco.
Registre los datos y realice una curva de absorbancia Vs pH y determine el punto isoeléctrico de la caseína.
Compare cualitativamente el grado de turbidez de cada tubo y compare con lo obtenido por espectrofotómetro.


RESULTADOS

TABLA 1 absorbancia según pH

Grafico 1

Absorbancia
pH
0,273
3,6
0,286
3,8
0,295
4
0,287
4,2
0,302
4,5
0,248
4,7
0,28
5,1
0,295...