Jhan

Reactivos y materiales.

Asa de siembra
Portaobjetos
Colorantes para la tinción de Gram. (Cristal Violeta, Lugol, Alcohol Acetona)
Colorantes para la tinción de ZiehlNeelsen.
Preparaciones para teñir por Ziehl Neelsen
Mechero bunzen
Aceite de cedro
Agua destilada estéril
Placas y tubos con cultivos.
Microscopio.



Instrumentos de siembra: Los instrumentosempleados son:

Asa de alambre
Aguja de alambre
Hisopo
Pipeta
Espátula de Drigalsky
Jeringuilla



Procedimiento.
Preparación del frotis a partir del cultivo:
1. Coloque sobre la lámina portaobjeto una gotade agua destilada estéril.
2. Esterilice el asa de siembra a la llama del mechero.
3. Arrastre una pequeña porción del cultivo bacteriano con el asa en condiciones asépticas.
4. Suspenda lascélulas en la gota de agua sobre el portaobjeto.
5. Deje secar al aire.
6. Fije la preparación cortando con la lámina tres veces la llama del mechero.


Tinción de Gram
Cubra el frotis con cristal violeta al1%, espere 30 segundos y lave con agua corriente.
Cubra el frotis con lugol, espere 30 segundos y lave con agua corriente.
Cubra el frotis con alcohol etílico o alcohol acetona, espere 30 segundos ylave con agua corriente
Cubra el frotis con el colorante safranina, espere 30 segundos y lave con agua corriente.
Secar al aire.
Adicione una gota de aceite de cedro sobre la preparación y observe almicroscopio con el objetivo de mayor aumento (100X).
Realice un esquema en su cuaderno de lo observado y anote las características morfológicas y tintoriales del microorganismo problema.

Tinción deZiehl Neelsen
Cubra el frotis con fucsina y caliente el colorante sobre la lámina dándole calor a la lámina por debajo hasta que se observe la emisión de vapores. Espere 5 minutos y lave con abundanteagua corriente.
Cubra la lámina con alcohol-ácido, espere 2 minutos y lave con agua corriente.
Cubra la preparación con azul de metileno, espere 30 segundos y lave con agua corriente.
Secar al...