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PRÁCTICA DE LABORATORIO
Clase No. 3

Técnicas de Biología Molecular para el
análisis de ácidos nucleicos
(ADN y ARN)

Figure 6-28 Essential Cell Biology (© Garland Science 2010)

BB2.

A. Cornejo T.

2011-02

El dogma de la Biología Molecular

Figure 5-9 Essential Cell Biology (© Garland Science 2010)

BB2.

A. Cornejo T.

2011-02

El dogma de la Biología MolecularFigure 1-2 Essential Cell Biology (© Garland Science 2010)

BB2.

A. Cornejo T.

2011-02

Técnicas en
Biología Molecular
Ácidos Nucléicos

Análisis
de
restricción

RFLP

AFLP

BB2.

Secuenciamiento
de ADN

Amplificación
por Reacción
en Cadena de
la Polimerasa

Electroforesis
de Ácidos
nucléicos

A. Cornejo T.

Hibridación

Southern
Blot

2011-02Northern
Blot

Reacción en Cadena de la Polimerasa
Buffer

dNTPs

Mg++
Primer
DNA pol
Agua free

DNA templado

Figure 6-2 Essential Cell Biology (© Garland Science 2010)

BB2.

A. Cornejo T.

2011-02

Figure 2-24 Essential Cell Biology (© Garland Science 2010)

BB2.

A. Cornejo T.

2011-02

Secuenciación de ADN
Esta técnica se emplea para la lectura de la secuencia debases nitrogenadas de los nucleótidos de una molécula de
ADN.
Para la lectura de la secuencia de las
bases nitrogenadas de los nucleótidos
se parte de una sola de las cadenas…

cebador o primer,
complementario a la cadena
de interés.

BB2.

A. Cornejo T.

2011-02

BB2.

A. Cornejo T.

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BB2.

A. Cornejo T.

2011-02

Enzimas de restricción
Las enzimas derestricción son
nucleasas que cortan ADN de doble
cadena cuando reconocen un patrón
de secuencia específico.
Generan
fragmentos
de
ADN
conocidos como fragmentos de
restricción. Las enzimas de restricción
son herramientas imprescindibles en
biología molecular, ingeniería genética
y biotecnología.

BB2.

A. Cornejo T.

2011-02

BB2.

A. Cornejo T.

2011-02

Polimorfismo delongitud de fragmentos de
restricción (RFLP)
Comparar patrones de bandas generados a partir de moléculas de
ADN de diferentes individuos que han sido sometidas a digestión con
enzimas de restricción.

Hibridación de Ácidos nucleicos
Es el proceso de complementación de pares de bases
entre dos cadenas sencillas de ADN, ADN y ARN , o
ARN y ARN .

BB2.

A. Cornejo T.

2011-02

Tiposde sondas según el ácido
nucleico
- DNA bicaternario, dsDNA (double strand DNA)
Se obtiene mediante PCR a partir de una secuencia
de DNA clonadas en un vector.
- DNA monocaternario, ssDNA (single strand DNA)
Se obtienen mediante síntesis
artificial de
oligonucleótidos.
- Ribosondas (Sondas de ARN)
Se obtienen a partir de una secuencia de DNA
clonada en un vector que posea los promotorespara
su transcripción.
BB2.

A. Cornejo T.

2011-02

BB2.

A. Cornejo T.

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BB2.

A. Cornejo T.

2011-02

BB2.

A. Cornejo T.

2011-02

BB2.

A. Cornejo T.

2011-02

 End – labelling

BB2.

A. Cornejo T.

2011-02

¿Qué significa Blotting?
Es una técnica utilizada en biología molecular y
genética en la cual se produce una transferencia deproteínas o material genético (ARN, ADN) hacia un
contenedor (nitrocelulosa, nylon).

BB2.

A. Cornejo T.

2011-02

¿Qué detecta el Southern
Blot?
El Southern Blot es una técnica utilizada en Biología
Molecular para la detección de una secuencia
específica de DNA.

Este método fue conocido como Southern Blot
en honor a su creador un biólogo británico
Edwin Southern ganador delLasker Award de
Biología Molecular en el 2005. Mas adelante
bajo este mismo fundamento se implementa el
Northen Blot, Western Blot y South-western
Blot
BB2.

A. Cornejo T.

2011-02

¿Cómo se realiza un Southern Blot?
1) Colocar endonucleasas de restricción para cortar moléculas
pesadas de DNA en pequeños fragmentos (10 ug DNA en
400 ul)
2) Realizar electroforesis en gel de agarosa
3)...