Justificacion De La Inv.

CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN HPLC
La cromatografía de líquidos de alta resolución es la técnica de separación más ampliamente utilizada, con unas ventas anuales de equipos de HPLC que se aproximan a la cifra de cientos de miles de millones de pesetas. Las razones de la popularidad de esta técnica son su sensibilidad, su fácil adaptación a las determinaciones cuantitativas exactas,su idoneidad para la separación de especies no volátiles o termolábiles y, sobre todo, su gran aplicabilidad a sustancias que son de primordial interés en la industria, en muchos campos de la ciencia y para la sociedad en general. Algunos ejemplos de estos materiales incluyen los aminoácidos, proteínas, ácidos nucleicos, hidrocarburos, carbohidratos, drogas, terpenoides, plaguicidas, antibióticosesteroides, especies organometálicas y una cierta variedad de sustancias inorgánicas.

La Figura 4.1 pone de manifiesto que los distintos procedimientos que utilizan la cromatografía de líquidos tienden a ser complementarios por lo que a sus campos de aplicación se refiere. Así, para solutos con masas moleculares superiores a 10 000, a menudo se utiliza la cromatografía de exclusión, aunque ahoratambién es posible tratar estos compuestos con cromatografía de reparto en fase inversa. Para especies iónicas de baja masa molecular, se utiliza con frecuencia la cromatografía de intercambio iónico. Los métodos de reparto se aplican a las especies poco polares pero no iónicas. Además, este procedimiento se utiliza muchas veces para la separación de los integrantes de una serie homóloga. Lacromatografía de adsorción se elige con frecuencia para separar compuestos como, por ejemplo, los hidrocarburos alifáticos de los alcoholes alifáticos.

Figura 4.1. Aplicaciones de la cromatografía de líquidos

Por otro lado, la discusión sobre el ensanchamiento de banda del tema 2 es aplicable a la cromatografía de líquidos. A continuación se ilustra el importante efecto del tamaño de partículadel relleno y se describen otras dos causas del ensanchamiento de zona, que a veces son de notable importancia en cromatografía de líquidos.

Efectos del tamaño de partícula del relleno. El coeficiente de transferencia de masa de la fase móvil es función inversa del cuadrado del diámetro de las partículas que constituyen el relleno. Como consecuencia de ello, la eficacia de una columna de HPLCdebería mejorar espectacularmente cuando disminuye el tamaño de partícula. Por ejemplo una reducción del tamaño de partícula de 45 a 6 μm origina una disminución de diez o más veces de la altura de plato.

Ensanchamiento de banda extra columna en cromatografía de líquidos. En cromatografía de líquidos, tiene lugar a veces un ensanchamiento de banda significativo fuera del relleno de la columna.Este ensanchamiento, denominado ensanchamiento de banda extra columna, tiene lugar cuando se transporta el soluto a través de tubos como los que se utilizan en los sistemas de inyección, en los detectores y en los tubos que conectan los distintos componentes del sistema. El ensanchamiento proviene de la diferente velocidad de flujo que hay entre las capas de líquido adyacentes a las paredes del tuboy las del centro. Como consecuencia, la parte central de una banda de soluto se mueve con más rapidez que la periferia. En cromatografía de gases la difusión compensa la dispersión extra columna. Sin embargo, la difusión en los líquidos es significativamente menor, y con frecuencia este tipo de ensanchamiento de banda se hace
evidente.

Cuando se utilizan columnas de pequeño diámetro, elensanchamiento extra columna puede hacerse bastante importante. En este caso, todos los esfuerzos han de orientarse a la reducción del radio de los tubos del sistema externos a la columna.

Efecto del tamaño de muestra en la eficacia de la columna. La cantidad de muestra (μg de muestra/g de relleno) también afecta a la eficacia de la columna. Para las aplicaciones con columnas de reparto y...