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SEPARACIONES POR CROMATOGRAFÍA

SEPARACIONES POR
CROMATOGRAFÍA
Conceptos generales.
Clasificación de los métodos cromatográficos.
Separación cromatográfica
Esquema básico de un cromatógrafo
Cromatografía líquida de alta resolución. HPLC.
Cromatografía de gases

SEPARACIONES POR CROMATOGRAFÍA
„ Las fases cromatográficas son dos:
„ *La fase móvil: que fluye a través de una faseestacionaria, arrastrando con ella a los
compuestos de la mezcla.
„ *La fase estacionaria: en la cual están
retenidos los componentes de la muestra, y a
través de la cual fluye la fase móvil
arrastrando a los mismos.

„ Cromatografía: técnica

de separación en la cual,
los componentes de la
muestra, se distribuyen
entre dos fases de
diferente naturaleza, como
consecuencia de lavariación de velocidad que
se establece al ser
arrastrados por una fase
móvil, líquida o gaseosa, a
través de una fase
estacionaria, sólida o
líquida.

SEPARACIONES POR CROMATOGRAFÍA
„ La cromatografía fue originalmente descrita

por Tswett en 1906
„ Ideó un método para separar pigmentos de

las plantas utilizando un tubo de vidrio lleno
de CaCO3
„ Después de añadir un extracto de lasplantas
y lavarlo con un disolvente orgánico observó
que se separaban diferentes bandas
coloreadas en el interior de la columna.

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SEPARACIONES POR CROMATOGRAFÍA
„ Los componentes de la muestras se

distribuyen en el interior del lecho
cromatográfico al ser arrastrados por la fase
móvil
„ Las especies individuales quedan retenidas
en la fase estacionaria en función de lasinteracciones que tienen lugar tales como:
Adsorción superficial
Solubilidad
carga

SEPARACIONES POR CROMATOGRAFÍA
„ tiempo de retención tR: tiempo

que tarda cada sustancia en
abandonar el sistema
cromatográfico. Esta retención se
ejerce en función de las
características moleculares de
cada compuesto.
„ Elución: proceso por el cual
todos los solutos terminan por
abandonar la columnaSEPARACIONES POR CROMATOGRAFÍA

„ La aplicación práctica de

la cromatografía consiste
en hacer pasar la fase
móvil a través de la
columna cromatográfica
que contiene la fase
estacionaria, donde están
retenidos los solutos.

SEPARACIONES POR CROMATOGRAFÍA
„ el proceso cromatográfico depende de una

constante de equilibrio:

KD =

n /V
n Vm
Cs
Vm
= s s = s ⋅
= k´⋅
Cm nm / Vm nmVs
Vs

K ´=

tR − t0
t0

tR= es el tiempo de retención del soluto.
t0= es el tiempo de retención de la fase móvil, o tiempo que
tarda la fase móvil en atravesar la columna cromatográfica.

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SEPARACIONES POR CROMATOGRAFÍA
„ CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS

TIPO

F.ESTACIONARI

F. MÓVIL

INTERACCION

Adsorción

Sólido

líquido-gas

fuerzas V.W.

Cambioionico

Resina

Líquido

f.elect.

Exclusión

Gel

líquido

tamaño part.

Afinidad

Sólido

líquido

interac bio.

Partición

Líquido

líquido-gas

solubilidad

SEPARACIONES POR CROMATOGRAFÍA
„ En cromatografía líquida podemos distinguir dos
„
„

„
„
„

modalidades básicas:
Cromatografía en fase normal: fase móvil no polar y
la fase estacionaria es polar(gel de sílice)
Cromatografía en fase invertida: fase móvil de
naturaleza polar y fase la estacionaria no polar
(cadena hidrocarbonada que puede ser :
*Cadena larga: C-18
*Cadena intermedia: C-8
*Cadena corta: C-2

SEPARACIONES POR CROMATOGRAFÍA
„ También se pueden clasificar en función de

la forma en la que se lleve a cabo:
„ a) PLANA: La fase estacionaria se coloca

sobre unasuperficie plana
„ b) COLUMNA: se utiliza un tubo de vidrio
cilíndrico como soporte de la fase
estacionaria y se hace pasar a través de ella
la fase móvil.

SEPARACIONES POR CROMATOGRAFÍA
„

También en cromatografía de partición hay
que establecer otra distinción según sea la
retención de la fase estacionaria líquida sobre
el sólido soporte:

„ Convencional o clásica cuando la fase...