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Técnicas de siembra:
El método de siembra por estría en placa
Es el método más fácil y el más usado para obtener cultivos axénicos. Para ello, con un asa de siembra se tomauna muestra de la población mixta y a continuación se hacen estrías sobre la superficie de un medio sólidopreparado en una placa Petri (a las placas Petri también se les denomina simplemente placas). Conforme se van haciendoestrías en zigzag con el asa, cada vez se van depositando en la superficie del medio menos microorganismos. A continuación, se flamea el asa, se toca en la región donde se han realizado las últimas estrías y se continúa la siembra con la misma técnica, en la superficie de medio sin sembrar aún. Repitiendo este proceso varias veces se logra separar células individuales. A continuación, las placasse incuban en un lugar adecuado, permitiendo que las células aisladas experimenten un número suficiente de divisiones para formar colonias visibles. Aunque cada colonia posiblemente representa un clon derivado de una sola célula, no podemos asegurarlo. Quizás, dos células quedaron depositadas tan juntas que han originado una única colonia mixta. Por tanto, para asegurarnos de que hemos obtenido uncultivo axénico, conviene repetir el procedimiento a partir de una colonia bien aislada en la primera placa. Las colonias que se desarrollen la segunda vez, serán, casi con toda seguridad, cultivos axénicos.
Los métodos de vertido en placa y extensión en placa
En estos métodos, las suspensiones de células microbianas se diluyen antes
de su siembra en placa. Se siguenestas técnicas cuando lamuestra contiene tantos microorganismos, que la dilución no se puede realizar en unasola etapa. Por ejemplo, una suspensión con mil millones de células por mililitro debe ser diluida 10
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veces paraobtener una suspensión con un centenar de células por mililitro, Por tanto, se realizan diluciones seriadas
 
(envarias etapas), nomalmente de diez en diez, pero a veces de cien en cien. Para realizardiluciones de diez endiez, se añade 1 ml de la suspensión bacteriana a 9 ml (le medio estéril o solución salina, igualmente estéril. Seagita vigorosamente para diluir las células y el proceso se repite cuantas veces sea necesario. A continuación, sepuede proceder de dos maneras diferentes.En el método de vertido en placa, las muestras diluidas se mezclan con agar fundido y se vierten enplaca.Algunas colonias quedarán embebidas en el agar y otras crecerán en la superficie. Las colonias superficiales seextenderán y serán más grandes. En el segundo método (extensión en placa), las muestras diluidas se siembrandirectamente en la superficie de la placa de agar, extendiéndolas con avuda de un asa de Diralsky de cristalestéril. La suspensión se absorbe en el agar, dejando las células microbianassobre la superficie. En ambastécnicas las placas se incuban hasta la aparición de las colonias. Como en el método de siembra por estría, noexiste la seguridad de que las colonias que aparecen en las placas sembradas por extensión o en el agar solidificado sembrado por el método del vertido en placas sean cultivos axénicos hasta que se repita el proceso.Las dos técnicas de siembra por diluciónpresentan la ventaja de que permiten obtener un mayor número decolonias aisladas que el método de siembra por estría, por tanto se eligen cuando se ha de seleccionar una cepaa partir de una mezcla con varios tipos de microorganismos.Para obtener un cultivo axénico mediante este método:

a) Hacer diluciones seriadas de la suspensión bacteriana hasta obtener una muestra con sólo unos pocoscientos debacterias(b) verter la muestra en un tubo con agar a sobrefusión, mezclar y verter el contenido en una placa Petri.(c) Después de la incubación, se desarrollan colonias en el agar (más pequeñas) y en su superficie (másgrandes).Método de aislamiento por siembra por estría en placa: Para obtener un cultivo axénico:(a) esterilizar un asa de siembra por flameado en la llama de un mechero(b)...