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Instituto Politécnico Nacional
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Hernández Morfín Katia Daniela, Fuentevilla Alvarez Miguel Giovanny

Grupo 2OM1 Sección 4
Práctica No. 1: Determinaciónde aminoácidos terminales con grupo alfa amino libre. (Método de Sanger)
OBJETIVOS
Identificar los aminoácidos que contienen el grupo alfa-amino terminal de las cadenas de la hemoglobina con ayudadel método de sanger.
INTRODUCCIÓN
Los grupos amino N-terminales experimentan reacciones químicas como la vacilación y la carbonización un ejemplo de ello es el método de sanger que se utiliza parala determinación de péptido y proteínas ya que el Fluorodinitrobenceno (DNFB) se combina con la amina del aminoácido liberándose ácido fluorhídrico y se forma un dinitrofenil aminoácido.
Estareacción se puede utilizar para establecer la identidad del aminoácido terminal de una proteína portadora del grupo amino libre y también es muy útil para conocer el número exacto de cadenas que contiene unamolécula de proteína puesto que la reacción solo se produce con grupos amino libres.
Para romper los enlaces todos o la mayoría de los enlaces pepiticos después de la reacción de sanger se hidrolizacon HCl 6N bajo presión y temperatura ya que la unión del dinitrofenilo y el grupo amino permanece estable el hidrolizado va a contener aminoácidos libres y dinitrofenil derivados y estos lospodemos pueden extraerse del hidrolizado con éter para después identificarse por medio de una cromatografía. El fluorodinitrobenceno también reacciona con grupos imidazol, fenolicos y épsilon-amino, estosderivados se separan fácilmente al extraer el hidrolizado con éter.



RESULTADOS:
Frente de solvente: 31.9 aprox
Sustancia
Distancia recorrida (cm)
RF.
DNP-phe
18.5
0.5799
DNP-val
23.70.7428
DNFB
16
0.5015
DNP-glu
21.1
0.6614
Muestra 1°
12.5
0.3918

DISCUSIONES:
INTERPRETACIÓN EN LA PREPARACIÓN DEL DERIVADO DINITROFENILADO:
La hemoglobina se disolvió con NaHCO3 mas...