La cepa PNKP
Fue capaz de crecer en el medio con As (III) como única fuente de energía y tenía 89,11% de As (III) la eliminación dentro de 48 h. esta cepa podría ser un candidato potencial para su aplicación en el arsénico remediationto al de agua contaminada.
METODOLOGIA APLICADA
El muestreo y la tensión de aislamiento:
Se recogieron muestras de agua subterránea y del suelo del distritode Warin Chamrap, distrito Khong Chiam El medio contenía 0,2% (w / v) extracto de levadura, 0,8 g / l (NH4) 2SO4, 0,4 g / l KH2PO4, 0,18 g / l MgSO4 • 7H2O, y 1,75 g / l de NaCl y ajustar el pH a 7,0 con NaOH. Las muestras se inocularon a EG medio suplementado con 0,38 mM de As (III) (como NaAsO2) Liao et al.(2011). Los matraces se incubaron a 30 ° C en un rotativo agitador (150 rpm) durante 5días. El cultivo madre se mantuvo en Luria-Bertani caldo (caldo LB) con 15% de glicerol a -70 ° C para su posterior
usa. Gihring y Banfield (2001).
Proyección de As (III) bacterias resistentes
Las cepas aisladas se inocularon en EG medio, y se incubaron con agitación a 30 ° C durante 24 h.
La cultura (20 l) fue lanzada sobre placa de agar EG complementar con As (III) a una concentración de 1,0,5,0, y 10,0 mM y se incubó a 30 ° C durante 72 h. Gihring y Banfield (2001) arsenito-resistente se define como la capacidad de bacterias que crecen en la placa de agar que contiene varios EG concentración de As (III) Liao et al.(2011). Inhibitoria mínima concentración (MIC) se definió como la más baja concentración de arsenito añadió que completamente crecimiento inhibido. Mediciones por triplicadoeran realizado para cada aislamientos. Simeonava et al. (2004) y Liao et al. (2011).
Ensayo de crecimiento bacteriano y la eliminación arsenito
Las cepas resistentes a arsenito seleccionados fueron proyectado para el crecimiento y la actividad arsenito oxidante. Una sola colonia se cultivó en medio EG (pH 7,0) suplementado con 0,58 mM de As (III) a 30 ° C en una agitador rotatorio (150 rpm)durante 48 h. Los cultivos fueron retirado y se centrifugó a 5500 xg a 4 ° C durante 10 min (Edwards et al., 1989). El sobrenadante se determinó para residual de As (III) usando el ensayo de ditiocarbamato de dietilo plata (APHA, 1998). Controles sin inoculación también se incubaron bajo la misma condición. (Lane et al., 1985).
Arsénico-transformación por PNKP-S2
La cepa seleccionada, PNKP-S2, eraprueba de arsénico-transformación mediante el uso de un AgNO3 cualitativa como descrito por Simeonava et al. (2004) y Liao et al. (2011) con ligeras modificaciones. Brevemente, la noche a la mañana cultivo se centrifugó y después se lavó dos veces con solución salina normal. El matraz se incubó a 30 ° C en un agitador rotatorio (150 rpm) durante 48 h. Posteriormente, el cultivo bacteriano secentrifugó, y 100 l de sobrenadante se mezcló con 100 l de una solución de AgNO3 0,1 M(Lane et al., 1985).. Los precipitados de Resultados que contiene arsénico se coloreó de amarillo claro de Ag3AsO3 (orthoarsenite plata) debido a As (III) a la luz marrón-rojo de Ag3AsO4 (orthoarsenate plata) debido a As (V). (Altschul et al., 1997)
El análisis estadístico
Los experimentos se llevaron a cabo al menospor duplicado, y por triplicado en algunos casos. Los resultados representan las medias de los tres experimentos separados. Las desviaciones estándar e intervalos de confianza del 95% fueron calculado utilizando Microsoft Excel TM. (Liao et al.,2011)
¿En qué transforma al compuesto el metabolismo del microorganismo?
Todas las cepas fueron proyectado para la eficiencia tolerante arsénico a 1-10 mMde arsenito de sodio. El arsénico es estable en varios oxidación estados: arsina (-III), arsénico elemental (0), arsenito (+ III), y arsenato (+ V), pero la más común observado en el medio ambiente son la forma trivalente forma; [As (III) H3AsO3] y pentavalente arsenito arseniato [HAsO4 2-; As (V)] (Smedley y Kinniburgh, 2002).Estos métodos requieren generalmente una etapa de oxidación a...
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